優(yōu)質(zhì)紅錐遺傳多樣性分析.pdf

1、紅錐(CastanopsishystrixA.DC.)，屬殼斗科常綠喬木，具有生長快、材質(zhì)優(yōu)、適應廣等優(yōu)良特性。本實驗目的是通過ISSR分子標記、過氧化物和酯酶同工酶、rbcL基因序列差異比對，從不同角度探討10個優(yōu)質(zhì)紅錐品系的遺傳多樣性，并且結合重要生理指標進行綜合分析。主要實驗結果如下： (1)通過ISSR對10個優(yōu)質(zhì)紅錐品系親緣關系分析： 實驗確定紅錐ISSR-PCR最佳擴增條件為20ul反應體系中：模板60n

2、g，1UTaq酶，1.5mmol/LMg2+，dNTP0.25mmol/L，引物0.5μmol/L，2％甲酰胺。PCR擴增條件：94℃預變性5min，94℃變性30S，52～55℃復性45s，72℃延伸2min，40個循環(huán)，72℃延伸7min。利用STATIS統(tǒng)計軟件的歐氏可變類平均法構建類型之間的分子系統(tǒng)樹，聚類分析可將10個優(yōu)質(zhì)紅錐品系分為四類。 (2)同工酶分析： 過氧化物同工酶：電泳結果表明紅錐過氧化物同工酶

3、可在三個位置顯帶，并集中分布于兩個區(qū)域(A、B)，其中A區(qū)可認為是紅錐的特征譜帶，浦北具有B區(qū)的特殊條帶，可以將其與其它紅錐品系區(qū)分開來。 酯酶分析：酯酶譜帶的分布據(jù)Rm的大小分為A、B、C、D三個區(qū)段。即，A區(qū)：0.38～0.44；B區(qū)：0.49；C區(qū)：0.57；D區(qū)：0.81～0.92。A區(qū)靠近負極，所帶負電荷較弱，電泳速度慢，共有2條譜帶，Rm呈現(xiàn)逐漸增大規(guī)律，為紅錐的特征譜帶。B區(qū)較A區(qū)靠近正極，電泳速度較快，共有1條

4、譜帶，為廣東2號、憑祥、博白共有。C區(qū)電泳速度較快，共1條譜帶，為博白、蒼梧共有。D區(qū)電泳速率最快，共3條譜帶，其中浦北占有三條譜帶，可以看作是其特有帶型，博白占有其中一條。 (3)rbcL基因序列比對分析： 通過PCR擴增得到10個紅錐品系的rbcL基因全序列，均為1.513kb，序列比對表明從256bp～1455bp10個紅錐品系之間16處堿基發(fā)生變異，變異率為1％，其中306bp處和634bp處10個紅錐品系較

5、對照同屬的castanopsislucida發(fā)生相同的變異，可以看作屬內(nèi)進化信息堿基。ISSR聚類的第一類群中的廣東1號、容縣、憑祥、東蘭較castanopsislucidarbcl序列均發(fā)生堿基變異，并且容縣和憑祥在426bp處發(fā)生相同變異，第四類群浦北在3處堿基位置較其它9個品系發(fā)生變異，其它第二、第三的3個品系較castanopsislucida沒有發(fā)生變異，可以推論ISSR分析的第二、三類群與同屬的castanopsisluci