錐栗遺傳多樣性SRAP分析.pdf

1、錐栗為殼斗科栗屬植物，是我國重要的木本糧食樹種。我國長江以南錐栗資源豐富，自然分布廣，類型多樣，但大多資源處于野生狀態(tài)，遺傳背景復(fù)雜。為充分挖掘利用錐栗野生種質(zhì)資源和科學(xué)合理評(píng)價(jià)現(xiàn)有品種資源，本文應(yīng)用SRAP分子標(biāo)記方法，以湖南野生錐栗資源為主，對(duì)采自湖南、浙江、四川、貴州、福建五省的17份野生錐栗居群資源及23個(gè)錐栗栽培品種進(jìn)行了遺傳多樣性分析，旨在為錐栗遺傳背景分析和種質(zhì)創(chuàng)新提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　1、建立了適用于錐

2、栗的SRAP-PCR最佳反應(yīng)體系:總體積20μL時(shí)，模板DNA濃度40ng，Taq酶濃度2.0U，Mg2+濃度1.8mmol/L，dNTP濃度0.28mmol/L，引物濃度0.6μmol/L。
　　2、篩選出適合錐栗SRAP遺傳多樣性分析的引物。利用10個(gè)隨機(jī)挑選出的模板從100個(gè)引物組合中篩選出15個(gè)擴(kuò)增條帶清晰、穩(wěn)定性好、多態(tài)性高的引物組合，即Em1-Me2、Em1-Me3、Em2-Me1、Em2-Me2、Em2-Me3、Em

3、3-Me2、Em3-Me5、Em5-Me2、Em7-Me1、Em7-Me3、Em9-Me7、Em9-Me9、Em9-Me10、Em10-Me6、Em10-Me10。
　　3、17個(gè)野生錐栗居群的SRAP遺傳多樣性分析表明野生錐栗遺傳多樣性豐富，是錐栗種質(zhì)創(chuàng)新的重要來源。
　　本研究利用篩選出的15個(gè)引物組合，對(duì)17個(gè)野生錐栗居群的221個(gè)樣本進(jìn)行擴(kuò)增，共擴(kuò)增出221個(gè)位點(diǎn)，平均多態(tài)位點(diǎn)數(shù)為155.06，多態(tài)百分率為70.16

4、％?？傔z傳多樣性指數(shù)(Ht)、居群內(nèi)遺傳多樣性指數(shù)(Hs)、Nei's基因多樣性指數(shù)、Shannon's信息指數(shù)分別為0.3636、0.2466、0.2460、0.3677，說明野生錐栗居群具有較高的遺傳多樣性和變異度。其中，衡山(HS)居群的多態(tài)率最高，為85.07％，吉首小溪村(JS)居群次之，為83.26％，表明衡山、湘西一帶為湖南省野生錐栗居群遺傳多樣性最豐富的區(qū)域。17個(gè)居群間基因分化系數(shù)(Gst)為0.3217，基因流（Nm

5、*）為1.0541，反映出種級(jí)水平上有67.83％的遺傳變異存在于居群內(nèi)部，居群基因交流頻繁。
　　UPGMA聚類分析表明，瀏陽溪江居群和衡山居群間的遺傳相似性最大，親緣關(guān)系最近;貴州黎平居群和岳陽月田鎮(zhèn)居群間的遺傳相似性最小，表明它們的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)，遺傳差異較大。
　　4、23個(gè)錐栗品種的SRAP遺傳多樣性分析:
　　利用篩選出的15個(gè)引物組合，對(duì)23個(gè)錐栗品種進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增出來的片段大小主要在150～2500bp之

6、間，共擴(kuò)增出221個(gè)位點(diǎn)，多態(tài)位點(diǎn)有197個(gè)，占比89.14％，說明錐栗品種間具有較高的遺傳多樣性水平。23個(gè)錐栗品種的遺傳相似性系數(shù)在0.66～0.85之間，且在遺傳相似性系數(shù)為0.66處，大尖嘴單獨(dú)聚為一類，反映出它的遺傳基礎(chǔ)與其他品種具有較大的差異;在遺傳相似性系數(shù)最大處，華栗2號(hào)和鐵錐被聚為一類，表明這兩個(gè)品種親緣關(guān)系最近，遺傳差異最小。
　　此外，本研究還構(gòu)建了Em1-Me2、Em2-Me1、Em2-Me2和Em2-Me