基于SRAP分析冬凌草種質(zhì)的遺傳多樣性.pdf

1、冬凌草來自于唇形科Lamiaceae香茶菜屬Isodon的碎米椏Isodon rubescens(Hemsl．) Hara。它絕大部分生長(zhǎng)于長(zhǎng)江流域和黃河流域，道地產(chǎn)區(qū)在濟(jì)源太行山周邊地區(qū)；冬凌草屬陽性耐陰植物，略喜陰，抗寒性強(qiáng)，常生于林地、山坡、灌木叢、礫石地及路邊等向陽處，冬凌草以全草入藥。
　　近幾年來，對(duì)冬凌草主要的特征性化學(xué)成分二萜類研究頗多，特別是ORI和 OGP-46，二者都具有明顯的藥理活性。鄭州大學(xué)藥學(xué)院關(guān)于冬凌

2、草的課題組在長(zhǎng)期研究濟(jì)源市冬凌草時(shí)發(fā)現(xiàn)一個(gè)規(guī)律性的特殊現(xiàn)象：某些種群或個(gè)體中有 ORI，而有些含有 OGP-46。但是這兩種二萜類主要成分不同時(shí)存在于同一植株內(nèi)，并且從植株表面無法辨別。
　　化學(xué)成分存在的差異的現(xiàn)象在植物化學(xué)上被稱為化學(xué)型。化學(xué)型本質(zhì)是植物體內(nèi)的次級(jí)代謝產(chǎn)物的差異，屬于種內(nèi)變異。化學(xué)型的產(chǎn)生是環(huán)境和遺傳因素共同作用的綜合產(chǎn)物，同時(shí)也與生長(zhǎng)發(fā)育得各個(gè)階段有關(guān)。
　　本論文主要從遺傳因素中的基因組 DNA序列的

3、堿基差異方面探究冬凌草出現(xiàn)該種內(nèi)差異的可能原因。首先驗(yàn)證冬凌草的兩種化學(xué)性等。結(jié)果顯示：濟(jì)源市的冬凌草可根據(jù)特征成分的不同分為兩種類型：一類是含ORI的冬凌草，一類是含OGP-46的冬凌草，與預(yù)期的設(shè)想一致。
　　為了鑒定冬凌草的兩種不同化學(xué)型，對(duì)不同采集地的6個(gè)冬凌草的種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性的初步研究和分析，采用L49(75)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)SRAP-PCR反應(yīng)體系中影響擴(kuò)增反應(yīng)的5個(gè)因素（Mg2+，dNTPs，Taq DNA聚合

4、酶，DNA模板，引物濃度）及退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果顯示：冬凌草最佳的SRAP-PCR反應(yīng)體系50ul中含模板 DNA20ng，5ul的10×PCR buffer，2mmol·L?1Mg2+的4.0ul，2000μmo l·L?1dNTPs1.0ul，Tag酶0.5U，正向和反向引物各1ul，dd H2O35.5ul；最佳退火溫度為50℃。5個(gè)正向引物和6個(gè)反向引物共組成30個(gè)引物組合，其中有6對(duì)引物能夠擴(kuò)增出多態(tài)性條帶，測(cè)序條帶與NCB

5、I數(shù)據(jù)庫內(nèi)的基因序列比對(duì)值為72.36％，相似度偏低；對(duì)兩種不同化學(xué)型的冬凌草基因序列測(cè)序進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn)基因相似度介于16.74%～79.42%(PCR擴(kuò)增條帶大小相似的測(cè)序比對(duì)值介于78.46%～79.42%，差異較大的條帶比對(duì)值介于16.49%～37.7%)。說明化學(xué)型不同的冬凌草基因序列具有較大的差異，并且 DNA信息不受繁殖方式及來源地的影響。從遺傳因素角度為研究這種差異提供了一定的參考。冬凌草SRAP-PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化和初步