部分國(guó)蘭品種（系）的SRAP遺傳多樣性研究.pdf

1、國(guó)蘭（Chinese Cymbidium）主要包括春蘭（Cymbidium goeringii）、蕙蘭（Cymbidium faberi）、建蘭（Cymbidium ensifolium）、墨蘭（Cymbidium sinense）、春劍（Cymbidium tortisepalum var. longibracteatum）、蓮瓣蘭（Cymbidium tortisepalum）、豆瓣蘭（Cymbidium serratum）等8種地

2、生蘭類(lèi)型。國(guó)蘭種類(lèi)多樣，品種繁多，近些年來(lái)種間雜交及種內(nèi)雜交又得到快速發(fā)展，這給國(guó)蘭品種的分類(lèi)和遺傳多樣性研究帶來(lái)了很大的困難。一直以來(lái)，國(guó)蘭多以形態(tài)學(xué)性狀，尤其是花部形態(tài)性狀作為品種分類(lèi)的依據(jù)。然而，形態(tài)學(xué)分類(lèi)在國(guó)蘭品種分類(lèi)中，特別是雜交品種分類(lèi)中存在很大的局限性。本研究對(duì)63個(gè)國(guó)蘭品種（系）的形態(tài)調(diào)查，并采用SRAP分子標(biāo)記對(duì)其進(jìn)行多態(tài)性分分析及UPGMA聚類(lèi)分析，在分子水平上探討國(guó)蘭的遺傳多樣性以及試圖找出雜交品種的親本來(lái)源，以期

3、為國(guó)蘭的品種鑒定、分類(lèi)，確定親本來(lái)源、品種保護(hù)以及指導(dǎo)雜交育種提供有價(jià)值的參考資料。
　　本研究取得的主要成果如下：
　　（1）本試驗(yàn)比較了變色硅膠干燥和液氮速凍兩種方法保存的國(guó)蘭葉片提取的DNA質(zhì)量，結(jié)果表明由變色硅膠干燥的國(guó)蘭葉片所提取的DNA完整性較好，無(wú)明顯降解，質(zhì)量較高，在減少多糖類(lèi)及其他代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生等方面甚至優(yōu)于液氮速凍。因此變色硅膠保存法適用于國(guó)蘭野外或遠(yuǎn)距離采樣時(shí)的保存方法。
　　（2）本試驗(yàn)以國(guó)蘭雜

4、交品種（系）為材料，采用L16（45）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs、模板及引物等5個(gè)重要影響因素進(jìn)行優(yōu)化，確定國(guó)蘭雜交品種（系） SRAP-PCR反應(yīng)的最優(yōu)反應(yīng)體系為（25μL體系）：Taq DNA聚合酶：1U；Mg2+：1.8mM；dNTPs：0.08mM；模板DNA：100ng；引物：上下游各0.3mM；10×PCR Buffer：2.5μL。
　　此外，本試驗(yàn)采用DNA混合池技術(shù)（DNA pool

5、ing）快速篩選SRAP引物，從180對(duì)SRAP引物組合中篩選出32對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物豐富、多態(tài)性高的引物組合。與常規(guī)方法相比，該技術(shù)明顯縮短試驗(yàn)周期、節(jié)約了模板用量，為快速高效篩選SRAP引物提供了新思路。
　?。?）本試驗(yàn)使用篩選出來(lái)的32對(duì)SRAP引物組合，對(duì)63個(gè)國(guó)蘭品種（系）進(jìn)行擴(kuò)增，共擴(kuò)增條帶（NTL）923條，平均每對(duì)引物組全合產(chǎn)生28.84條，在擴(kuò)增的條帶中具有多態(tài)性條帶有（NPL）881條，多態(tài)性位點(diǎn)百分率（PPL）為9

6、5.45％，說(shuō)明國(guó)蘭品種（系）在分子水平上具有很高的遺傳多樣性。
　?。?）本試驗(yàn)研究的63個(gè)國(guó)蘭品種（系）的居群間Nei’s遺傳距離的變化范圍在0.0448-0.1541之間，遺傳相似度變幅為0.8572-0.9524。遺傳相似系數(shù)在0.6890左右處，63個(gè)國(guó)蘭品種（系）分為7類(lèi)，除個(gè)別春蘭原生種外，基本能把各個(gè)種區(qū)分開(kāi)，親本相同的雜交品種（系）也優(yōu)先聚于一類(lèi)，同時(shí)也驗(yàn)證了部分交雜的親本來(lái)源。
　?。?）遺傳變異的分析顯