獸醫(yī)臨床診斷實習(xí)

1、實習(xí)一、整體及一般檢查,孫 泉Tel:83911344E-mail：sunquan@ccmu.edu.cn,比格犬（Beagle）醫(yī)學(xué)應(yīng)用,實驗外科：心血管外科、腦外科神經(jīng)循環(huán)發(fā)達：動脈粥樣硬化、心律失常藥物代謝、毒理學(xué)、新藥臨床前安全評價消化系統(tǒng)慢性試驗,一、實驗?zāi)康?掌握整體狀態(tài)的觀察方法；掌握被毛與皮膚的檢查方法及臨床意義；掌握可視粘膜的檢查方法及臨床意義；掌握體表淋巴結(jié)的檢查方法及臨床意義；掌握體溫、脈搏和呼吸

2、數(shù)測定方法及其臨床意義。,一、犬的保定-徒手保定,此法適用于小型犬、幼齡大中型犬聽診；皮下肌肉注射,犬的保定-扎口保定,適用于性情較兇或有攻擊性的犬,犬的保定-頸圈保定,限制犬回頭舔咬驅(qū)趕或四肢術(shù)部,二、全身狀態(tài)檢查,精神狀態(tài)：沉郁？興奮？營養(yǎng)狀況：肌肉豐滿？骨骼外露？姿勢：站立？行走？,三、皮膚觀察、觸診,觀察被毛狀態(tài)：平順？光澤？脫毛？觀察皮膚顏色：黃染？蒼白？感受皮膚溫度、濕度：鼻端？耳根？檢查皮膚彈性：2s？檢查皮膚

3、是否有腫脹、破損等：穿刺？,,檢查皮膚彈性,四、可視粘膜、體表淋巴結(jié)檢查,檢查眼結(jié)合膜、鼻粘膜、口腔黏膜是否正常：濕潤？顏色？分泌物？囊腫？破潰？檢查下頜淋巴結(jié)檢查耳朵：耳廓皮膚？外耳道？,,檢查眼結(jié)合膜,檢查下頜淋巴結(jié),,正常,外耳炎,五、體溫測定,動物站立保定。術(shù)者一手持體溫計，將其水銀柱甩至35攝氏度以下，用酒精棉球消毒，蘸上少許石蠟油。術(shù)者站在動物后方，一手抓住尾巴抬起，另一手持體溫計旋轉(zhuǎn)插入直腸，約二分之一后固定。 5分鐘

4、后，取出體溫計，用一棉球擦去體溫計上的粘液，然后讀出度數(shù)。,六、脈搏數(shù)測定,動物站立保定。術(shù)者蹲于動物正后方，一手抓住尾巴，另一手的食指與中指于股內(nèi)側(cè)觸診股動脈。心臟聽診，看是否一致。（70-160次/分）,七、呼吸數(shù)的測定,術(shù)者用聽診器聽取氣管每分鐘的呼吸數(shù)。,,用手背感覺鼻孔呼出氣流數(shù),實習(xí)二、呼吸系統(tǒng)檢查,掌握呼吸運動檢查內(nèi)容、方法及臨床意義上呼吸道檢查內(nèi)容、方法及臨床意義胸部檢查內(nèi)容、方法及臨床意義,一、呼吸運動檢查,1.呼

5、吸類型：胸式呼吸； 腹式呼吸：提示胸部病變。2.呼吸節(jié)律：犬1:1.64 吸氣延長：上呼吸道狹窄 呼氣延長：支氣管狹窄、肺彈性不足3.呼吸對稱性：對稱呼吸 呼吸不對稱：單側(cè)性肺病,二、上呼吸道檢查,1.鼻端檢查：濕潤涼爽、無鼻液 鼻端干燥熱感：熱性疾病2.喉氣管觸診：人工誘咳 陽性：炎癥,喉氣管檢查,三、胸部檢查,1.胸廓形狀與對稱性 觸摸胸壁溫度與敏感性2.肺叩診區(qū)的變化 擴大

6、：肺過度膨脹（肺氣腫）、胸腔積氣（氣胸） 縮?。耗c臌氣、腹腔積液,上界距背中線2-3指寬與脊柱平行的線；前界為自肩胛骨后角并沿其后緣所引直線；后界由三點決定，上界與第12肋骨的交點， 髖結(jié)節(jié)水平線與第11肋間交點，坐骨結(jié)節(jié)線與第10肋間交點，肩關(guān)節(jié)水平線與第8肋間交點，將這三點連起來止于第6肋間。,1.濁音 2.水平濁音 3、4.清音,3.肺扣診音,,4.肺聽診音聽診時，不論大小動物，宜先從中1/3開始，向前向后逐漸聽取，其次上

7、1/3，最后下1/3。每個部位聽2～3次呼吸音，再變換位置，直至聽完全肺。,,肺泡呼吸音增強：代償性呼吸機能亢進；它標志著肺實質(zhì)的病理變化，具有重要的診斷意義，常見于大葉性肺炎，小葉性肺炎和滲出性胸膜炎等等時的健康肺區(qū)。肺泡呼吸音減弱：①肺組織的炎癥、浸潤、實變或其彈性減弱、喪失。②進入肺泡的空氣量減少③呼吸音傳導(dǎo)障礙。當胸腔積液，胸膜增厚，胸壁腫脹時，由于呼吸音傳導(dǎo)不良，則肺泡呼吸音減弱。,實習(xí)三、心血管系統(tǒng)檢查,掌

8、握心搏動、心音形成原因，以及最佳聽診、叩診的位置；熟悉心搏動、心音的病理變化和臨床意義；掌握脈搏的頻率、性質(zhì)、節(jié)律的變化及臨床意義,一、心搏動的檢查,檢查方法：被檢動物取站立姿勢，使其左前肢向前伸出半步，以充分暴露心區(qū)。檢查者位于動物左側(cè)方。視診時，仔細觀察左側(cè)肘后心區(qū)被毛及胸壁的振動情況；觸診時。檢查者右手放于動物背部，左手緊貼左側(cè)肘后心區(qū)，感知胸壁的振動，主要判定頻率及強度。,聽診心率及心音,病理變化,心搏動減弱：心臟衰竭引起心

9、室收縮無力、胸壁增厚、胸腔積水。心搏動增強：心臟病代償期（心肌炎、心包炎初期）、輕度貧血、疼痛性疾病。心搏動移位：心臟受到滲出液、腫瘤等的壓迫。,二、心臟叩診,檢查方法：對犬等小動物用指指叩診，舉其左前肢，以充分暴露心區(qū)。心臟前部為肩胛肌肉掩蓋，肌肉后方的部分接近心臟一半，直接與胸壁接觸的只是心臟的一部分，這一區(qū)域絕對濁音區(qū)；心臟大部分被肺部所掩蓋，這部分半濁音，這一區(qū)域為心臟的相對濁音區(qū)，標志心臟大小。犬心絕對濁音區(qū)左側(cè)第4-

10、5肋間，上緣達肋骨與肋軟骨結(jié)合部，大致與胸骨平行，下緣受肝濁音影響五明顯界限。,,病理變化,心區(qū)敏感：提示心區(qū)疼痛，常見于心包炎和心膜炎。心臟叩診濁音區(qū)縮?。悍螝饽[。心臟叩診濁音區(qū)擴大：可見心肥大、肺萎陷、心擴張及滲出性心包炎、心積水。,三、心音的聽診,正常心音：心搏動的地方可聽到“咚-嗒”兩個有節(jié)律不斷交替出現(xiàn)的聲音。第一心音：心室收縮音，主要是兩個房室瓣關(guān)閉產(chǎn)生的振動。第二心音：主、肺動脈瓣關(guān)閉產(chǎn)生的振動。犬心音清亮、第一

11、心音與第二心音音調(diào)、強度及持續(xù)時間大致相同。,犬心音最佳聽診點,第一心音：二尖瓣口：左側(cè)第5肋間，胸廓下1/3的中央水平線；三尖瓣口：右側(cè)第4肋間，肋骨與肋軟骨結(jié)合部稍下方；第二心音：主動脈瓣口：左側(cè)第4肋間，肩關(guān)節(jié)水平線下方一、二指處；肺動脈瓣口：左側(cè)第3肋間，靠胸骨的邊緣處。,,心音聽診時主要注意心音的頻率、強度、性質(zhì)及有無分裂、雜音或心率不齊等變化。心音增強：熱病初期、劇烈疼痛、輕度貧血或失血。心音減弱：心機能障礙后

12、期、頻死期及滲出性胸膜炎或心包炎。心雜音：拍水音、摩擦音。,實習(xí)四 消化系統(tǒng)檢查,胃腸觸診、聽診的方法及其臨床意義糞便樣品采集處理方法糞便酸堿度測定糞便潛血試驗糞便的顯微鏡檢查,腸胃觸診,腸胃聽診,（一）糞便酸堿度,一般用pH試紙測定。酸堿度與飼料成分及腸內(nèi)容物發(fā)酵或腐敗過程有關(guān)。取新鮮糞便（從糞內(nèi)外層采?。?-3g，至于試管中，加蒸餾水8-10mL，混勻后用pH試紙測定。當腸管內(nèi)糖類發(fā)酵旺盛時，酸度增加；蛋白質(zhì)分解旺盛，堿

13、度增加，見于胃腸炎。(正常弱堿),（二）潛血試驗,潛血是胃腸道有少量出血，紅細胞破壞，一直糞便外觀無異常改變，顯微鏡也不能證實。肉眼及顯微鏡均無法檢測的微量血液稱為潛血或隱血。糞便潛血對消化道出血的診斷有重要價值。常用的檢驗方法有聯(lián)苯胺法和鄰聯(lián)甲苯胺法。兩者原理和檢驗方法基本一致。,,原理：血紅蛋白有氧化酶的作用，能分解過氧化氫而產(chǎn)生新生態(tài)氧，是聯(lián)苯胺氧化為聯(lián)苯胺藍而呈現(xiàn)藍色反應(yīng)。試劑：聯(lián)苯胺冰醋酸溶液：取聯(lián)苯胺少許（約一刀

14、尖）于小試管，加冰醋酸2mL,震蕩溶解；過氧化氫溶液,,檢查方法：用鑷子取綠豆大小糞塊，與載玻片上涂成約1cm范圍。然后將玻片在酒精燈上緩慢通過數(shù)次（破壞糞便中的酶類），待玻片冷卻后滴加冰醋酸溶液約1mL及新鮮過氧化氫溶液1mL,用牙簽攪動混合，在白紙上觀察。,,結(jié)果判定：60s出現(xiàn)藍色反應(yīng)為痕跡反應(yīng)，用±表示30s出現(xiàn)藍色反應(yīng)為陽性反應(yīng)，用＋表示15s出現(xiàn)藍色反應(yīng)為強陽性反應(yīng)，用＋＋表示3s出現(xiàn)藍色反應(yīng)

15、為最強陽性反應(yīng)，用＋＋＋表示陽性提示出血性胃腸炎、犬鉤蟲病、潰瘍性結(jié)腸炎等能引起胃腸道出血的疾病。,（三） 糞便顯微鏡檢查,生理鹽水涂片法 用竹簽挑取含粘液的膿血部分，成型便取多處，混懸于生理鹽水中制成涂片，厚度以能透視紙上字跡為宜。,生理鹽水1－2滴,挑取少量糞便與鹽水混勻制成涂片。,玻片,,低倍：全片觀察有無蟲卵、原蟲與包囊高倍：仔細觀察病理成分的形態(tài)和結(jié)構(gòu)至少觀察10個以上視野,White Blood Cells

16、 , 白細胞,白細胞為圓形、有核、結(jié)構(gòu)清晰的細胞，正常糞便中不見或偶見。膿球結(jié)構(gòu)不清晰，常聚集在一起，甚至成堆存在。糞中發(fā)現(xiàn)多量白細胞及膿球表明腸道有炎癥或潰瘍。,Red Blood Cells , 紅細胞,正常糞便無紅細胞。糞中大量的紅細胞可能是后部腸道出血。有少量散在、形態(tài)正常的紅細胞，同時有多量白細胞，說明腸道有炎癥。,巨噬細胞,大單核細胞，核形多不規(guī)則，常吞有顆粒及細胞碎屑。,上皮細胞,正常糞便很難見到，有多量上皮細胞同時有

17、白細胞見于腸道炎癥。,寄生蟲蟲卵,寄生蟲感染,,腸胃觸診聽診糞便收集處理、pH值測定潛血試驗糞便顯微鏡檢查,實習(xí)五、泌尿系統(tǒng)檢查（一）,一、實習(xí)內(nèi)容：掌握腎臟、膀胱的檢查方法；掌握尿液的正常顏色、酸堿度、尿蛋白（硝酸法）、尿潛血（聯(lián)苯胺法）的檢查方法。二、動物及器材：尿液、PH試紙、試管、滴管、硝酸、聯(lián)苯胺、冰醋酸、過氧化氫溶液,腎臟觸診,膀胱觸診,一、尿液采集保存,一、尿液采集和保存采集原則：早晨。立即檢驗，超過30mi

18、n，夏天可冷藏或加防腐劑。采集方法：自然、導(dǎo)尿、膀胱穿刺（不用于血檢）。保存：防腐劑，3-4滴甲醛（100mL尿液）細菌學(xué)檢查不可加。,二、尿液化學(xué)檢驗,一、尿液酸堿度測定（pH）取決于飼料，植物為主的產(chǎn)生堿性尿；高蛋白谷物及動物性蛋白，通常產(chǎn)生酸性尿。哺乳幼齡動物均為酸性尿。犬pH:6-7pH降低（酸性尿）：熱性病、長期饑餓、酸中毒（酮血?。﹑H增高（堿性尿）：尿道阻塞、膀胱炎。注意：新鮮。二氧化碳減少、細菌

19、分泌尿素產(chǎn)生氨而使尿液變堿。,,二、尿蛋白定性檢測原理：蛋白質(zhì)遇酸發(fā)生凝固沉淀。試劑：35%硝酸溶液方法：取一小試管，先加35%硝酸1-2mL,后沿試管壁緩慢滴加尿液，使兩液面重疊，靜置3-5min觀察結(jié)果，兩液面產(chǎn)生白色環(huán)者為陽性反應(yīng)。白色越寬，表示蛋白含量越高。,,三、尿潛血測定（聯(lián)苯胺法）原理：血紅蛋白的鐵具有過氧化酶的作用，可分解過氧化氫放出氧，使聯(lián)苯胺氧化成藍色。方法：取尿3-5mL置潔凈試管中煮沸（破壞

20、其他過氧化酶）。冷卻后加聯(lián)苯胺冰醋酸溶液數(shù)滴，再加3%過氧化氫數(shù)滴，混合，數(shù)秒鐘現(xiàn)藍色反應(yīng)，表明尿蛋白陽性。,,腎臟、膀胱臨床檢查尿液收集、pH值檢測尿蛋白檢測尿潛血測定,實習(xí)六、泌尿系統(tǒng)檢查（二）,尿糖的測定尿液酮體的測定尿液顯微鏡檢查,尿糖的測定（班氏試劑法）,原理：在高熱和強堿溶液中，葡萄糖或其他還原性糖能將溶液中藍色的硫酸銅還原為黃色的氫氧化銅，進而形成紅色的氧化亞銅沉淀。根據(jù)沉淀有無和色澤變化判斷含量。班氏試

21、劑+氫氧化鈉 葡萄糖酸鈉+氧化亞銅（紅）試劑：班氏試劑：結(jié)晶硫酸銅17.3g，無水碳酸鈉100.0g，檸檬酸鈉173.0g及蒸餾水若干。先將無水碳酸鈉和檸檬酸鈉溶于700mL蒸餾水中，加熱促其溶解，另將結(jié)晶硫酸銅溶于100mL蒸餾水中，待硫酸銅溶解后將其緩慢傾入前液中并加蒸餾水至1000mL，過濾后保存于橙色瓶中備用。方法：取班氏試劑5mL，加尿液0.5mL充分混合，加熱煮沸1-2min，靜置5min觀察。管底出現(xiàn)黃色

22、或紅色沉淀者為陽性反應(yīng)。沉淀越多表示尿葡萄糖含量越高。,,,注意事項：1.尿中如有蛋白質(zhì)，先把尿加熱煮沸，過濾后再檢。2.尿液與試劑必須按要求加入，否則會出現(xiàn)假陽性。,酮體的測定（郎氏法）,原理：丙酮或乙酰乙酸與亞硝基鐵氰化鈉作用后，再與氨液接觸可產(chǎn)生紫紅色化合物。冰醋酸可抑制肌酐產(chǎn)生類似的反應(yīng)。試劑：亞硝基鐵氰化鈉、冰醋酸、濃氨水（28%）檢測方法：取尿液2mL于小試管內(nèi)，加入亞硝基鐵氰化鈉結(jié)晶數(shù)小粒，震蕩使其溶解，再加冰

23、醋酸3-4滴，混勻后，將試管傾斜，沿管壁緩慢加入濃氨水0.5-1mL,觀察。,,結(jié)果判定：在兩液交界處呈現(xiàn)紫紅色環(huán)即為陽性。根據(jù)顏色產(chǎn)生的時間，可做定量判定：立即出現(xiàn)深紫紅色環(huán)（+++） 逐漸出現(xiàn)紫紅色環(huán)（++） 10min內(nèi)出現(xiàn)淡紫色環(huán)（+） 10min后不顯色（—）,尿液顯微鏡檢查（尿沉渣）,尿沉渣標本的制備與檢查方法： 將尿液靜置或

24、低速（1500-200r/min）離心5-10min。倒去上清液，剩余少量尿液，然后混合，用吸管吸少量放在載玻片上，蓋上蓋玻片，在顯微鏡較暗視野下觀察。觀察到大體印象后再轉(zhuǎn)換高倍鏡仔細觀察。通常無需染色，即可進行尿沉渣檢驗。染細胞-瑞氏染液；脂肪-蘇丹Ⅲ；細菌-革蘭氏,紅細胞：小而圓，淡褐色，無細胞核。尿中出現(xiàn)紅細胞，見于腎炎、膀胱炎、尿道炎、結(jié)石及泌尿器官出血。,白細胞：比紅細胞略大，有細胞核。尿中出現(xiàn)大量白細胞，見于腎及尿路炎癥

25、。,腎上皮細胞：圓形或多角形，細胞核大而明顯，核位于細胞中央。尿中出現(xiàn)，表明腎實質(zhì)損傷，見于急性腎小球腎炎、腎病等。,,腎實質(zhì)嚴重損傷,,尿液中鹽類結(jié)晶的析出與否決定于該物質(zhì)的飽和度及尿液的pH、溫度和膠體物質(zhì)的濃度。,實習(xí)七、漿膜腔積液檢查,漿膜腔包括胸腔、腹腔、心包腔、關(guān)節(jié)腔。這些腔在生理情況下，其中只有少量的液體，這些正常的少量液體在腔內(nèi)起潤滑作用，以減少臟器活動的磨擦，一般采集不到。病理情況下，漿膜腔內(nèi)有大量液體潴留而形成漿膜腔

26、積液。因積液部位不同而分胸腔積液（胸水）、腹腔積液（腹水）、心包腔積液和關(guān)節(jié)腔積液。根據(jù)產(chǎn)生的原因及性質(zhì)不同，漿膜腔積液分為漏出液和滲出液。,,（1）漏出液：是通過毛細血管濾出，并在組織間隙或漿膜腔內(nèi)積聚的非炎癥性組織液，多為雙側(cè)性。常見原因和機制有：①毛細血管流體靜壓增高：常見于靜脈回流受阻、充血性心衰和晚期肝硬化；②血漿膠體滲透壓減低，見于血漿清蛋白的濃度明顯減低的各種疾病，如營養(yǎng)不良、腎病綜合癥、嚴重貧血；③淋巴回流受阻，見于絲

27、蟲病、腫瘤壓迫等；④鈉水潴留，見于充血性心力衰竭，肝硬化和腎病綜合癥。,,（2）滲出液：多為炎性積液，多為單側(cè)性，產(chǎn)生機制是由于微生物的毒素、缺氧以及炎性介質(zhì)等作用，使血管內(nèi)皮細胞損傷，血管通透性增高，以致液體、血液大分子物質(zhì)和細胞從血管內(nèi)滲出至血管外，組織間隙及漿膜腔所形成的積液，常見原因多為細菌感染所致，也見于腫瘤、外傷、血液、膽汁、胰液和胃液等刺激的非感染性的原因，如結(jié)核性、細菌性感染、淋巴瘤、間皮瘤、肺梗死、類風(fēng)濕病、SLE等

28、。,腹水的采集,抽取狗等大動物腹水，讓狗按自然站立位固定，穿刺部位在恥骨前緣與臍之間，腹中線兩側(cè)。剪毛消毒，局部浸潤麻醉。操作者左手拇指、食指緊繃穿刺部位的皮膚，右手控制穿刺深度做垂直穿刺。注意不可刺的太深，以免刺傷內(nèi)臟。穿刺針進入腹腔后，腹水多時可見因腹壓高而自動流出。腹水太少可輕輕回抽，并同時稍稍轉(zhuǎn)動一下針頭，一旦有腹水流出，立即固定好針頭及注射器的位置連續(xù)抽取。,,抽取大鼠、小鼠的腹水方法簡單，用左手拇指及食指捏住動物頸部皮膚，無

29、名指、小手指及手掌夾住其尾巴固定好動物，使其腹部略朝上，在腹股溝和腹中線之間，消毒皮膚,用8號針頭刺入腹腔,如腹壓高腹水自然流出，如腹水太少，可借助注射器抽取。 抽腹水時注意不可速度太快，腹水多時不要一次大量抽出，以免因腹壓突然下降導(dǎo)致動物出現(xiàn)循環(huán)功能障礙等問題。,一般檢查及臨床意義,（一）理學(xué)檢驗 1、量：該項目由臨床醫(yī)護人員測量或全部送檢驗科。積液量可隨病情、部位和抽取目的不同而異，可由數(shù)毫升至上千毫升。 2、透明度：可

30、根據(jù)標本不同的情況用“清”“渾濁”報告，積液的透明度常與其所含細胞、細菌、蛋白質(zhì)等程度有關(guān)。漏出液因其含細胞、蛋白質(zhì)少，且無細菌，常為清晰、透明液體。滲出液因含大量細胞、細菌等呈不同程度的渾濁。,3、凝固性： 漏出液中含纖維蛋白原甚微，一般不凝固，而滲出液中含較多纖維蛋白原和細菌、細胞破壞后稀放的凝血活酶，易凝固，但如果滲出液中含有纖維蛋白溶解酶時，可分解纖維蛋白而不出現(xiàn)凝固。粘稠樣積液多見惡性間皮瘤，其黏稠度高主要是由于其中透明質(zhì)

31、酸含量的增加。含有碎屑樣物質(zhì)的積液多見于類風(fēng)濕性疾病。,4、顏色： 紅色：淡紅色、暗紅色或鮮紅色。見于穿刺損傷、結(jié)核、腫瘤、內(nèi)臟損傷、出血性疾病等。 漿膜液為棕色：常見于阿米巴肝膿腫穿入胸膜腔。 漿膜液為黑色：提示胸膜霉菌感染。 漿膜液為綠色：常見銅綠假單胞菌感染（綠膿桿菌）。,白色：膿性或乳白色，見于化膿性感染時大量白細胞和細菌，胸導(dǎo)管阻塞或破裂時的炎性乳糜積液，積液含有大量脂肪變性細胞時的假性乳糜積液所致。 黃色或淡黃色

32、：見于各種原因的黃疸。,（二）化學(xué)檢查,漿膜黏蛋白定性（Rivalta試驗）取100mL量筒一個，加100mL清水。然后滴入冰醋酸2滴，混勻。再加入標本l-2滴立即觀察結(jié)果。如有明顯白云霧狀混濁，下降很快，沉淀能拖長20cm左右，為陽性反應(yīng)。如混濁不明顯，下降緩慢，中途消失者為陰性反應(yīng)。漏出液為陰性反應(yīng)，滲出液為陽性反應(yīng)。,（三）顯微鏡檢查,細胞分類計數(shù)取適量新鮮漿膜腔積液，離心沉淀，傾去上清液，將沉淀物涂成薄片（必要時沉淀物內(nèi)

33、加一滴血清，使沉淀物附在玻片上）。如穿刺液本身已甚混濁，可不離心，直接推制涂片。涂片干燥后，用瑞氏染液染色，做血細胞分類計數(shù)。,,漏出液內(nèi)細胞較少，主要是間皮細胞，體積較大，常聚集成堆，有時可見少數(shù)淋巴細胞。滲出液中細胞較多。嗜中性白細胞大量出現(xiàn)時，見于急性化膿性疾病。淋巴細胞大量出現(xiàn)時，見于慢性疾病，如慢性胸膜炎及腫瘤等。嗜酸性白細胞增多，見于過敏性疾病及寄生蟲病。如見到形態(tài)不規(guī)則而體積較大的細胞，胞漿中有空泡，核仁

34、或核分裂，可能為腫瘤細胞，必須慎重鑒定。,瑞氏染色液,原理與用途適用于各種脫落細胞和血細胞的形態(tài)觀察前的染色（涂片染色），為臨床觀察血細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)、識別血細胞及其異常變化、進行白細胞分類計數(shù)及檢查血液內(nèi)寄生蟲和細菌等診斷提供幫助。細胞核蛋白和淋巴細胞胞漿是由酸性物質(zhì)組成，它與堿性染料美藍結(jié)合，染成紫藍色，而細胞漿則相反，因含有堿性物質(zhì)而與酸性染料伊紅結(jié)合，染成粉紅色；經(jīng)瑞氏染色后，細胞核和淋巴細胞胞漿被染成紫藍色，細胞漿染成粉紅色。,

35、,使用方法1. 制作血液或脫落細胞涂片，自然干燥固定；2. 用蠟筆在血膜兩頭劃線，滴加瑞氏染液3～5滴以覆蓋整個血膜，固定1～2分鐘；滴加等量或稍多的緩沖液（未加緩沖液涂片上有染料顆粒殘留），吸球吹勻或搖動玻片染色5～10分鐘；3. 用流動水從玻片的一側(cè)沖去染液，自然干燥（或濾紙吸干）；4. 鏡檢。,,注意事項1. 制作血涂片應(yīng)注意：玻片應(yīng)干凈，推片與載片保持30～45°角，血液推開后應(yīng)立即在空氣中揮動，使其迅速干燥

36、，以免血細胞變形，固定后方可染色；2. 血膜未干透,細胞尚未牢固附在玻片上,在染色過程中容易脫落,因此血膜必需充分干燥；3. 染液的濃度、染色時間及實驗室的溫度要控制，染液越淡，室溫越低,所需染色時間越長，因此染色時間應(yīng)視具體情況而定；所加染液以覆蓋涂片為宜，不能過少，以免蒸發(fā)而染料沉淀；,,4. 細胞染色對氫離子濃度十分敏感，稀釋染液必須用緩沖液，沖洗用水應(yīng)近中性,否則各種細胞染色反應(yīng)異常，致使細胞的識別困難；5. 沖洗時應(yīng)用流

37、水將染液沖去，不能先倒掉染液，以免染料沉著于血片上；6. 染色液可重復(fù)使用，但不能無數(shù)次重復(fù)，若有沉淀物應(yīng)過濾后使用；7. 染色過深可用甲醇或酒精適當脫色,最好不復(fù)染。,實習(xí)八 血液檢查-白細胞分類計數(shù),白細胞分類計數(shù)是將血液制備成涂片，瑞氏染色后顯微鏡下根據(jù)白細胞的形態(tài)特征進行分類計數(shù)。通常分類100個白細胞，計算得出各種白細胞所占百分比。,器材與試劑,器材：載玻片、染色架、顯微鏡、香柏油、白細胞分類計數(shù)器、吸水紙等試

38、劑：瑞氏染液,犬采血,采血時將動物固定，局部剪毛、消毒，在靜脈向心端綁扎血帶或由助手緊握，使血管充盈，將注射器刺入靜脈，放松靜脈近端壓迫，以適當速度抽血，一次可抽血10-20mL。采血部位：前肢皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈采血,2024/1/22,91,制備血涂片,1)推片：血膜厚薄適中，邊緣整齊，外觀呈舌形，頭、體、尾分明。2）干燥3）標記,,染色,1）準備：血膜干透后，用蠟筆在兩端劃線，以防止染色時染液外溢。將血涂片放染色架上。

39、2）加染液：在涂片上滴加瑞氏染液數(shù)滴，以染液覆蓋整個血膜為度，稍靜置1min。3）加緩沖液：滴加緩沖液等量或多些，與上述染液充分混勻。4）染色：染色10min.5）沖洗：不要先倒掉染液，平持血涂片用流水緩緩沖洗干凈。6）干燥：直立血涂片，使其自然干燥。,2024/1/22,93,良好血涂片外觀－羽（子彈頭）狀尾部－周邊有空白－無劃痕,羽狀尾部,,2024/1/22,94,,不良血涂片,2024/1/22,95,白細

40、胞分類： 先用低倍鏡選擇厚薄適宜，染色良好，細胞分布均勻的體尾交界處，滴加香柏油一滴，油鏡下分類計數(shù)。分類時要有秩序的連續(xù)進行，避免主觀選擇視野。通常分類計數(shù)100個白細胞，計算并報告各種白細胞所占比例。,,低倍鏡下所見,結(jié)果記錄方式：Ne 正 一 Ly 正Mo 正Eo 正Ba 正,2024/1/22,96,體尾交界處,,理想?yún)^(qū)域,細胞重疊 細胞太稀,理想?yún)^(qū)域,2

41、024/1/22,97,各類成熟白細胞的形態(tài)學(xué)：,中性粒細胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈圓形，直徑10～13µm，胞漿染粉紅色，核形一葉（桿狀核）至五葉不等，以三葉者多見，染成深紫紅色，胞漿中有許多細小均勻紫紅色顆粒。,2024/1/22,98,嗜酸性粒細胞（Eo）：較中性粒細胞稍大，胞核多為兩葉，呈眼鏡、八字形，核染色質(zhì)粗糙染深紫紅色，胞漿內(nèi)充滿粗大均勻的嗜酸性顆粒，瑞氏染色時呈桔紅色，有折光性。,2024/1/22,99

42、,嗜堿性粒細胞（Ba）：胞漿中含有大小不等的嗜堿性顆粒，瑞氏染色時呈蘭黑色。于光學(xué)顯微鏡下常見胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活動而脫顆粒所致；核呈淡紫紅色?？床磺?，呈桿狀或分葉狀。,2024/1/22,100,淋巴細胞（Ly）：胞體呈圓形，直徑介于6～15µm之間，在成人血涂片中以小淋巴細胞為多見，直徑6～9µm，核大呈深紫色致密而濃染，胞漿量極少；大淋巴細胞胞漿量較多，呈清澈的淡藍色，可見少量嗜苯胺

43、藍顆粒，胞核圓或橢圓，常偏向細胞一側(cè)，染色較深。,2024/1/22,101,單核細胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上為12～20µm，胞體圓形、橢圓形或不規(guī)則形；核形多種多樣，最重要的特點是染色質(zhì)較細致疏松，呈絲網(wǎng)狀或條縷狀，著色較淡胞漿較多，淡蘭色，含大量細小塵土樣顆粒。,2024/1/22,102,正常犬外周血白細胞分類參考值：Ne 60%～70%Ly 12%～30%Mo

44、 3%～10%Eo 2%～10%Ba 0,[參考值],2024/1/22,103,1.血涂片制備要厚薄適宜、均勻、頭體尾分明，無溶血、無空洞。 2.很多因素影響涂片時血膜的厚度。血滴大、血粘度高、推片角度大、速度快則血膜厚，反之則血膜薄。 3.按一定順序，有秩序地連續(xù)進行，避免重復(fù)選擇視野。 4.分類計數(shù)時應(yīng)同時報告RBC和WBC的形態(tài)是否有異常。退化細胞不計