遺傳性疾病的分子診斷-上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系

1、分子診斷的臨床應(yīng)用,上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院樊綺詩(shī) 教授,用分子生物學(xué)技術(shù)通過(guò)檢測(cè)基因而達(dá)到診斷疾病的目的是生物學(xué)者在分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展的最初階段就有的設(shè)想。 上世紀(jì)70年代人們開始在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行研究，80年代以來(lái)，基因檢測(cè)在許多國(guó)家已成為常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目，主要用于感染性和遺傳性疾病等的診斷。,,1953年Watson 和Crick 提出脫氧核糖核酸的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型。1990年人類基因組計(jì)劃正式啟動(dòng)。2001年2月科學(xué)家宣布完成人類基

2、因組的全部序列圖。,DNA重組技術(shù)(DNA recombination) 轉(zhuǎn)基因技術(shù)(transgenic technique) 基因組學(xué)(genomics) 蛋白組學(xué)(proteomics) 基因治療(genotherapy) 生物芯片(biochip)等技術(shù) 已應(yīng)用到醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，對(duì)疾病機(jī)理的認(rèn)識(shí)、疾病的診斷、預(yù)防和治療產(chǎn)生了深刻的影響。,分子診斷不僅能早期對(duì)疾病作出確切的診 斷

3、，也能確定個(gè)體對(duì)疾病的易感性，判別 致病基因攜帶者并對(duì)疾病的分期、分型、 療效監(jiān)測(cè)和預(yù)后作出判斷。分子診斷已成為實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)的一個(gè)重要組 成部分，成為一門新的學(xué)科。Molecular diagnosis Molecular diagnostics,,一、基因檢測(cè)在感染性疾病中的應(yīng)用,,SARS相關(guān)冠狀病毒的分子診斷,2003年4月，香港研究者Peiris等報(bào)告了50 例SARS病人的臨床表現(xiàn)和病毒學(xué)研究結(jié)果

4、。一種新的冠狀病毒 (Coronavirus) 是SARS 的致病原因。 (Lancet, 2003, 361: 9365),2003年4月，德國(guó)漢堡Bernhard-Nocht熱帶醫(yī)學(xué)研究所學(xué)者Drosten等用隨機(jī)擴(kuò)增技術(shù)，獲得一段長(zhǎng)度為300bp的核苷酸序列。根據(jù)這段序列，建立了檢測(cè)新冠狀病毒的常規(guī)和實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)。

5、 www.nejm.com.org on April 10, 2003）,檢測(cè)標(biāo)本 痰液、咽拭子、鼻拭子、支氣管肺泡灌洗液 、血漿、糞便。檢測(cè)方法 1. 逆轉(zhuǎn)錄-巢式PCR (Reverse-Nested PCR) 2. 逆轉(zhuǎn)錄-實(shí)時(shí)PCR (Reverse-Real time PCR),有報(bào)道顯示，在可能SARS病人中病毒的檢出率為100%。在疑似SARS病人中的檢出率為23%。所有健康接觸者中

6、未檢測(cè)到病毒。,另一項(xiàng)研究顯示 檢測(cè)病毒的3種方法（血清學(xué)檢測(cè)、病毒分離、PCR技術(shù)）中，PCR技術(shù)的檢出率最高。,討 論,疾病的早期即可獲得陽(yáng)性結(jié)果(早于血清轉(zhuǎn)換期）。SARS患者中的陽(yáng)性率約為80%，對(duì)照中的陰性率約為98%～100%?，F(xiàn)有的PCR方法有較高的特異性但靈敏度較差，陰性結(jié)果不能排除病毒感染。,討 論,痰液中病毒RNA濃度極高，說(shuō)明病毒從呼吸道排放是主要傳播途徑。血清中檢測(cè)到極低濃度的病毒RNA，提示

7、病毒復(fù)制不僅發(fā)生于呼吸道。病人恢復(fù)晚期的糞便中存在病毒RNA，說(shuō)明糞便可能也是一種傳播途徑。鼻、咽拭子中含有的病毒RNA顯著少于痰液，提示不適合作為標(biāo)本（有可能漏檢）。,SARS相關(guān)冠狀病毒基因檢測(cè)必須注意的問(wèn)題,必須在規(guī)范的基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。應(yīng)采取必要的質(zhì)控規(guī)程，包括陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。陽(yáng)性結(jié)果時(shí)必須對(duì)原始樣本重復(fù)檢驗(yàn)： 或者擴(kuò)增另一個(gè)基因片段 或在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)同一樣本進(jìn)行檢測(cè)。,肝炎病毒基因的檢測(cè),臨

8、床價(jià)值主要體現(xiàn)在：病情評(píng)估 血清中病毒含量的多少與肝臟病理?yè)p害程度相關(guān)，病毒載量越高，肝組織炎癥反應(yīng)程度越重。療效預(yù)測(cè) 治療前病毒核酸載量越高，療效越差；載量越低，機(jī)體清除病毒的可能性越大。,,預(yù)后判斷病毒核酸載量持續(xù)處于高濃度者預(yù)后不良。垂直傳播途徑感染者，預(yù)后較差。反映肝細(xì)胞損害的其它指標(biāo)正常，但病毒核酸 水平經(jīng)常波動(dòng)者更易發(fā)展為肝硬化。,,病毒分型和耐藥檢測(cè)各個(gè)編碼區(qū)段存在著大量有意義的自然變異或藥物誘導(dǎo)的

9、變異，并由此產(chǎn)生不同的變異株，從而導(dǎo)致 HBV感染的不同血清學(xué)和臨床表現(xiàn)。檢測(cè)HBV的變異株對(duì)了解疾病機(jī)制、藥物耐受和指導(dǎo)用藥有一定的價(jià)值。,HPV基因的檢測(cè)在預(yù)防宮頸癌中的作用,,,宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，發(fā)病率在女性惡性腫瘤中居第二位，每年約有50萬(wàn)左右新發(fā)病例。我國(guó)每年有新發(fā)病例約13.15萬(wàn)，占世界宮頸癌新發(fā)病例總數(shù)的26%。,,持續(xù)的人乳頭瘤病毒(human papillomavirus, HPV) 感染是引起宮頸

10、癌和癌前病變的必要因素，93.0%-99.7%的宮頸癌組織中均可檢測(cè)到HPV DNA。高危型HPV-16和HPV-18分別占宮頸癌的50%和14%。高危型HPV的持續(xù)感染可使患宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)增加250倍。,,HPV DNA的檢測(cè)方法實(shí)時(shí)定量PCR (Real time PCR)核酸雜交捕獲（Hybrid CaptureⅡ，HCⅡ）,,HC Ⅱ可一次檢測(cè)所有致癌的13種高危型HPV。敏感度：對(duì)CIN Ⅱ、Ⅲ和癌的檢出率為 98%。

11、陰性預(yù)期值：對(duì)高度鱗狀上皮細(xì)胞病變或更高度病變的陰性預(yù)期值99.9%,,細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果為意義不明確的非典型細(xì)胞時(shí)，HPV基因的檢測(cè)能預(yù)測(cè)受檢者患宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)。細(xì)胞學(xué)檢查+HPV基因的檢測(cè)是宮頸癌前病變和宮頸癌篩查的最佳方法，成為預(yù)防宮頸癌的關(guān)鍵。,基因檢測(cè)在監(jiān)測(cè)移植物排斥中的作用,,關(guān)于多瘤病毒,人類多瘤病毒中常見(jiàn)的3種病毒：BK、JC、SV40。BK病毒于1971年首次從腎臟移植受體的尿液中分離出。病毒主要在宿主的細(xì)胞核內(nèi)進(jìn)行復(fù)

12、制。,,在美國(guó)，10歲以上的正常人群中60%～80%有BK病毒感染史。感染的病毒多潛伏于腎小管上皮細(xì)胞和尿道上皮細(xì)胞中。BK病毒重新激活大部分是由于免疫機(jī)制缺陷或大量使用免疫抑制劑后。,,腎臟移植術(shù)后大量使用免疫抑制劑，使BK病毒重新激活，大量復(fù)制。BK病毒復(fù)制進(jìn)一步發(fā)展，成為BK病毒感染的腎間質(zhì)性腎病（BKVAN）。BKVAN患者中60%～70%會(huì)發(fā)生遠(yuǎn)期的腎臟移植失敗。,,,,BK病毒感染已經(jīng)成為腎臟移植遠(yuǎn)期失敗的重要原因之

13、一。BK病毒感染越來(lái)越受到關(guān)注。,,早期無(wú)臨床癥狀，后期癥狀與腎移植排斥和藥物毒性反應(yīng)相似，易引起誤診和漏診。BK病毒感染和移植排斥治療原則相反：BK病毒感染需要降低免疫抑制劑量，而移植排斥則應(yīng)加大用量。,,因此，建立有效的BK病毒檢測(cè)和監(jiān)測(cè)體系是十分必要的。,,decoy細(xì)胞BK病毒感染的腎臟小管上皮細(xì)胞脫落至尿液。形態(tài)學(xué)檢測(cè)敏感性較好，但特異性差。細(xì)胞形態(tài)在尿液中很容易破壞。,巴氏染色的decoy細(xì)胞,未經(jīng)染色的decoy

14、 細(xì)胞,,,,,,BK病毒感染的檢測(cè),BK病毒的檢測(cè)血、尿中BK病毒核酸定量檢測(cè)尿液中decoy細(xì)胞檢查尿沉渣涂片原位雜交組織病理學(xué)檢查（判斷腎臟間質(zhì)性腎病）,腎臟移植術(shù)后病人BK病毒檢測(cè)的研究,對(duì)象瑞金醫(yī)院腎臟移植術(shù)后2個(gè)月～3年的患者95例正常人標(biāo)本60例研究方法尿沉渣細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)血、尿中BK 病毒DNA的定量檢測(cè),,,,,,,,,Decoy細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征:小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞核明顯增大，多偏向一側(cè)，核漿比例明顯

15、增加；細(xì)胞邊緣常常出現(xiàn)毛玻璃樣改變；胞漿有細(xì)小顆粒，較均勻，呈果凍狀；細(xì)胞核常較粗糙。,結(jié) 果,95例患者的尿沉渣形態(tài)學(xué)檢查，35例患者的尿沉渣中出現(xiàn)可疑的病毒感染腎小管上皮細(xì)胞（decoy細(xì)胞）。,,尿液中BK病毒核酸定量檢測(cè)14例尿液中檢測(cè)到BKV DNA，病毒載量為4×103～2×109/ml，平均為5.6×105/ml。發(fā)生病毒尿的中位時(shí)間為移植術(shù)后14個(gè)月。,,血漿中BK病毒核酸檢測(cè)14例病

16、毒尿中，有5例同時(shí)出現(xiàn)病毒血癥。核酸載量為2×104/ml～4.8×106/ml，平均為 4.2×104/ml。,,,陰性對(duì)照,,,6例病毒檢測(cè)陽(yáng)性的核酸標(biāo)本進(jìn)行序列分析。 所測(cè)片段序列均

17、為BK病毒的核酸序列,BK病毒核酸序列,核酸序列分析,,3例患者在臨床上出現(xiàn)不明原因的發(fā)熱、白細(xì)胞降低、緩慢的肌酐升高等癥狀，有1例甚至出現(xiàn)了尿道阻塞。臨床上認(rèn)為發(fā)生BKVAN的可能性較大，給予抗病毒治療。,病例1、2,治療前：尿液和血漿病毒核酸載量在104/ml～105/ml血肌酐分別為181μmol/L和168μmol/L治療后：血漿和尿液中BK病毒已檢測(cè)不出血肌酐降為160μmol/L和129μmol/L,,病例3,治

18、療前尿液中BK病毒核酸載量為2×109拷貝/ml尿沉渣細(xì)胞中見(jiàn)到大量decoy細(xì)胞和炎性細(xì)胞治療后尿液中BK病毒核酸載量降至105拷貝/ml尿沉渣細(xì)胞中decoy細(xì)胞明顯減少,治療前,治療10天后,治療20天后,,,,,,,,,,,,,討 論,文獻(xiàn)報(bào)道BK病毒的復(fù)制感染率為5%～60%，本研究中發(fā)生BK病毒復(fù)制的占14.7%。35例患者中發(fā)現(xiàn)decoy細(xì)胞，僅14例被證實(shí)存在病毒核酸，提示形態(tài)學(xué)檢查特異性差。腎

19、臟移植的患者容易導(dǎo)致包括BK病毒在內(nèi)的多種病毒感染。,,因此是否存在BK病毒感染，形態(tài)學(xué)僅作為篩查實(shí)驗(yàn)。病毒核酸定量可有效地動(dòng)態(tài)觀察病毒核酸的復(fù)制。,,BK病毒核酸定量檢測(cè)用于檢測(cè)BK病毒是否復(fù)制為是否需要進(jìn)行病理學(xué)檢查提供依據(jù)監(jiān)測(cè)疾病和評(píng)價(jià)治療效果預(yù)防間質(zhì)性腎病，防止移植遠(yuǎn)期失敗,二、遺傳性疾病的分子診斷,,分子診斷能夠檢出家系中的致病基因攜帶者或高危個(gè)體，能夠在胎兒出生前判斷其是否為患者，因此分子診斷是降低單基因遺傳病發(fā)

20、病率的根本措施。,,單基因遺傳病是由于某一基因結(jié)構(gòu)的變化或基因表達(dá)異常而導(dǎo)致的疾病用分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)致病基因的遺傳缺陷是診斷這類疾病最根本的手段,遺傳性疾病中常見(jiàn)的分子異常,遺傳性疾病的產(chǎn)生是由于一個(gè)（或數(shù)個(gè)）基因發(fā)生異常導(dǎo)致這些基因所載有的遺傳信息受到改變，而發(fā)病是通過(guò)遺傳物質(zhì)的表達(dá)產(chǎn)物——蛋白質(zhì)（或酶）的表現(xiàn)異常所致?；蛲蛔冎饕c(diǎn)突變、片段性突變和動(dòng)態(tài)性突變。,點(diǎn)突變 (point mutation),包括錯(cuò)義突變、無(wú)義

21、突變、移碼突變各種點(diǎn)突變所造成的后果： 蛋白質(zhì)分子量改變 蛋白質(zhì)合成量下降 無(wú)蛋白質(zhì)合成,,片段性突變(fragememtal mutation),核苷酸的丟失和增多缺失：基因中鹼基（遺傳物質(zhì)）的丟失插入：外來(lái)基因片段插入某一基因序列中倍增：基因內(nèi)部某一段序列發(fā)生重復(fù)基因重排：基因組中原來(lái)不在一起的基因由于某些原因組合排列在一起,動(dòng)態(tài)性突變(dynamic mutation),以三核苷酸為單位的重復(fù)序列在傳遞

22、過(guò)程中 不穩(wěn)定，會(huì)發(fā)生擴(kuò)展，即子代的重復(fù)次數(shù)往 往較親代大為增加，因此又稱動(dòng)態(tài)性突變。 脆性X綜合征：CGG重復(fù) 少年脊髓型共濟(jì)失調(diào)：GAA重復(fù) 亨廷頓病：CAG重復(fù),X染色體（xq27.3）的脆性位點(diǎn),脆性X綜合征是遺傳性智力缺陷最常見(jiàn)的一種。 致病基因FMR-1的5’端有CGG三核苷酸重復(fù)區(qū)。 普通男性群體中的患病率為1/4000。 普通女性群體中的患病率為1/6000。 患者智力低下、語(yǔ)

23、言障礙、行為異常、呈特殊 面容。,正常個(gè)體：CGG重復(fù)次數(shù)6~52次，中國(guó)人群以(CGG)28為多見(jiàn)。前突變(premutation)： (CGG) 53~230為攜帶者，雖表型正常，但在傳 遞過(guò)程中易發(fā)生進(jìn)一步擴(kuò)展，使后代的CGG重復(fù)次數(shù)大大增加，并 有異常表型。全突變： (CGG) ≥230時(shí)，100%的男性表現(xiàn)為典型的脆性X綜合征, 53%的女性表現(xiàn)為程度不同的智力低下。,遺傳性疾病基因診斷的策略,（一）

24、直接診斷策略 基因診斷的直接策略是通過(guò)各種分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)基因的遺傳缺陷，因此直接診斷的前提是被檢測(cè)基因的正常序列和結(jié)構(gòu)必須被闡明。 直接診斷由于是直接揭示遺傳缺陷，因而比較可靠。,,DMD的基因檢測(cè),Duchenne muscular dystrophy (DMD) 是一種高發(fā)病率、高致殘、高致死的X連鎖的遺傳性疾病，在3500個(gè)活產(chǎn)男嬰中即有一個(gè)患者。 DMD基因的全長(zhǎng)為250kb，有79個(gè)外顯子。 DMD 的

25、最主要遺傳缺陷是外顯子缺失，約占 60%～70%。,DMD基因外顯子的檢測(cè),,（二）間接診斷策略,間接診斷的實(shí)質(zhì)是在家系中進(jìn)行連鎖分析，通過(guò)分析可確定個(gè)體來(lái)自雙親的同源染色體中的哪一條為致病染色體，從而判斷該個(gè)體是否帶有致病基因。 間接診斷不是尋找 DNA 的遺傳缺陷，而是通過(guò)分析DNA的遺傳標(biāo)記的多態(tài)性估計(jì)被檢者患病的可能性。,間接診斷：分析DNA的遺傳標(biāo)記的多態(tài)性,雙等位基因(bi-allele）多態(tài)性：限制性

26、片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP） 第一代DNA遺傳標(biāo)記，所含信息量有限。 檢測(cè)技術(shù)：Southern印跡技術(shù),多等位基因多態(tài)性(multi-allele),小衛(wèi)星序列又稱串聯(lián)重復(fù)可變數(shù)目（variable number tandem repeats，VNTR）第二代DNA遺傳標(biāo)記以 6～70bp 為單位，以串聯(lián)形式排列，構(gòu)成數(shù)量可變的串聯(lián)重復(fù)序列等位基因常常達(dá)10個(gè)以上，信息量比 RFLP大

27、 檢測(cè)技術(shù)：PCR,,微衛(wèi)星序列 (microsatellite)以 2～6bp 為單位，重復(fù)次數(shù)可達(dá)幾十次，又稱短串聯(lián)重復(fù)序列(STR) 。在基因組中分布廣泛，出現(xiàn)的數(shù)目和頻率不同，具高度多態(tài)性。 檢測(cè)技術(shù)：PCR,單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide poly- morphism，SNP),第三代DNA的遺傳標(biāo)記，其多態(tài)性僅表現(xiàn)為 單個(gè)核苷酸的變異。在人類基因組中的數(shù)目

28、可達(dá)300萬(wàn)個(gè)，是一種信息量非常大的標(biāo)記系統(tǒng)。 檢測(cè)技術(shù)：DNA芯片技術(shù),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,C50: C49: C45: C44: Cjp:,11223,C50: C49: C45: C44: Cjp:,12212,21313,C50:

29、 C49: C45: C44: Cjp:,21121,21313,C50: C49: C45: C44: Cjp:,21121,21313,C50: C49: C45: C44: Cjp:,21121,12212,C50: C49: C45: C44: Cjp:,,12212,C50: C

30、49: C45: C44: Cjp:,21313,C50: C49: C45: C44: Cjp:,11223,12212,C50: C49: C45: C44: Cjp:,21313,C50: C49: C45: C44: Cjp:,21313,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,1

31、3,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,,,,,,,凝血因子Ⅷ(F8)基因的主要遺傳缺陷,點(diǎn)突變(point mutation) 缺失(deletion)倒位(invertion)：發(fā)生于第22號(hào)內(nèi)含子，可在40%-50%重型HA中檢測(cè)到,間接診斷的不確定性,遺傳標(biāo)記所帶的信息性有限新突變基因重組家系成員不完整,三、基因檢測(cè)在多基因病中的應(yīng)用,,,多基因病具一定的遺傳因素，家庭發(fā)病率高于人群發(fā)病率，但是

32、疾病的產(chǎn)生都以一定的環(huán)境條件為誘因，遺傳因素在其中所起作用程度各異。,多基因病中的遺傳因素是若干個(gè)易感基因微小作用的累加，某一易感基因結(jié)構(gòu)的變化不足以導(dǎo)致疾病的產(chǎn)生。,人類基因組多態(tài)性是多基因病基因診斷的基礎(chǔ)，易感基因多態(tài)性的檢測(cè)能幫助我們理解多基因病發(fā)生的機(jī)制，有助于對(duì)疾病的診斷和分類。,高血壓候選基因多態(tài)性分析在EH中的應(yīng)用前景,臨床分型 靶器官損傷研究 個(gè)體化治療,基因多態(tài)性與鹽敏感性高血壓,?-內(nèi)收素血管緊張素轉(zhuǎn)換酶

33、上皮鈉通道血管緊張素原心鈉素 ?2腎上腺素能受體 SA G蛋白亞單位3………,基因多態(tài)性與高血壓靶器官損傷,腦卒中 載脂蛋白E ?-纖維蛋白原 血管緊張素原 血管緊張素II的1型受體 內(nèi)皮型一氧化氮合酶 心鈉素,冠心病 副氧酶 凝血因子V 凝血因子VII 載脂蛋白B,ACE基因多態(tài)性與高血壓靶器官損傷,疾病

34、 研究報(bào)告數(shù) I D DD冠心病 30 + 11 % + 32 % 心肌梗死 15 + 12 % + 39 %腦卒中 5 + 22 % + 94 %高血壓腎病 19 + 10 % + 53 %糖尿病腎病 11 + 40 %

35、 + 56 % * 與II型相比，DD型和ID型發(fā)生上述疾病的危險(xiǎn)性增高程度 (ACE基因I/D多態(tài)性研究49959例的薈萃分析）,,ACE基因多態(tài)性：16號(hào)內(nèi)含子有一Alu重復(fù)序列，為插入/缺失多態(tài)性，構(gòu)成II、ID、DD三種基因型,基因多態(tài)性檢測(cè)與個(gè)體化治療,人類基因組計(jì)劃已經(jīng)完成，功能基因組研究正在實(shí)施。 有朝一日，臨床醫(yī)師能根據(jù)病人易感基因的多態(tài)性設(shè)計(jì)有效的、個(gè)

36、體化的治療方案，以達(dá)到最佳治療效果。,ATG基因多態(tài)性研究,目的：觀察ATG基因分型與限鈉鹽攝入及減輕體重后的 血壓變化和高血壓發(fā)病率間的關(guān)系對(duì)象：1509例基因分析：ATG基因G-A多態(tài)性結(jié)果：三年后高血壓發(fā)生率（%） 對(duì)照組 限鹽組 減輕體重組 AA型 45

37、 28 25 GG型 32 41 32 Hunt SC,et al: Hypertension, 1998;32:393-401,,,基因多態(tài)性分析指導(dǎo)抗高血壓藥物的選擇,藥物種類 基因

38、 利尿劑?-內(nèi)收素 ACE抑制劑ACE、AT1?-受體阻滯劑G蛋白（Gs?),四、腫瘤相關(guān)基因檢測(cè)在腫瘤病情監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用,,,腫瘤是由于遺傳物質(zhì)（腫瘤相關(guān)基因）發(fā)生突變而導(dǎo)致的疾病。腫瘤相關(guān)基因的突變只是增加了個(gè)體對(duì)腫瘤的易感性而并不一定馬上產(chǎn)生腫瘤，腫瘤的發(fā)生是一個(gè)多因素、多步驟打擊的過(guò)程。,實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)在急性早幼粒細(xì)胞白血病中的應(yīng)用,PML-RAR?融合基因是

39、 APL特異的分子標(biāo)志,,初發(fā)APL的PML-RAR?融合基因的拷貝數(shù)均大于1000。經(jīng)全反式維甲酸、ATRA +化療、三氧化二砷 治療獲得緩解后，其PML-RAR?融合基因的拷 貝數(shù)明顯降低，并隨著鞏固治療的進(jìn)行而進(jìn)一步降低。,,長(zhǎng)期無(wú)病生存的患者的PML-RAR?融合基因的拷貝數(shù)均長(zhǎng)期低于200一旦患者的檢測(cè)值高于該值，則強(qiáng)烈提示復(fù)發(fā)的可能,,APL完全緩解和復(fù)發(fā)時(shí)PML-RAR?融合基因的檢測(cè),C