細(xì)胞信號通路檢測總蛋白提取-安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院_第1頁
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文檔簡介

1、細(xì)胞信號通路檢測(一)總蛋白提取,病理生理學(xué)教研室,背景知識,背景知識,蛋白質(zhì)表達(dá)水平和細(xì)胞內(nèi)定位研究,信號蛋白分子表達(dá)水平及分子量檢測Western Blot analysis信號蛋白分子在細(xì)胞內(nèi)定位研究IMMUNOHISTOCHEMISTRY/IMMUNOCYTOCHEMISRYIMMUNOFLUORESCENCE (IF)GREEN FLUORESCENT PROTEIN (GFP, LIVE CELLS),實驗方法

2、、流程,細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞總蛋白提?。ū敬螌嶒瀮?nèi)容）WB 檢測信號通路相關(guān)蛋白表達(dá),實驗材料,HepG2肝癌細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)皿，細(xì)胞刮，RIPA裂解液，PBS，低溫離心機(jī)，冰盒，EP管，移液器,操作步驟,棄去細(xì)胞培養(yǎng)基，4℃預(yù)冷的PBS清洗細(xì)胞1次留適量PBS（一般為1ml，大皿可酌情增加）刮取細(xì)胞，12000rpm 4℃離心2min，去除上清液。向細(xì)胞沉淀中加入適量RIPA蛋白裂解液（含有蛋白酶抑制劑）輕吹充分混勻，放置冰上裂解30m

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