觀光木分子譜系地理學(xué)研究.pdf

1、觀光木（Tsoongiodendron odorum Chun）為木蘭科(Magnoliaceae)植物，是我國(guó)古老的孑遺樹(shù)種，被列為我國(guó)二級(jí)重點(diǎn)保護(hù)植物，對(duì)研究古代植物區(qū)系、古地理及古氣候具有重要的科學(xué)價(jià)值。本學(xué)位論文對(duì)采集于南嶺山地6個(gè)?。▍^(qū)）21個(gè)觀光木天然種群161個(gè)個(gè)體，采用葉綠體DNA非編碼區(qū)序列標(biāo)記開(kāi)展分子譜系地理學(xué)研究，旨在探討觀光木種群進(jìn)化及其瀕危機(jī)制，為科學(xué)制定觀光木遺傳資源保護(hù)方案提供種群遺傳學(xué)背景。主要研究結(jié)果如

2、下:
　　(1) cpDNA-PCR反應(yīng)體系優(yōu)化
　　采用單因素及正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，建立了觀光木cpDNA-PCR最優(yōu)反應(yīng)體系(20μL):50 ng模板DNA、1×PCR buffer、引物各0.2μmol·L-1、2.0 mmol·L-1MgCl2、0.3 mmol·L-1dNTP、1 UTaq DNA聚合酶。擴(kuò)增反應(yīng)程序:80℃預(yù)變性5 min;95℃變性1 min，退火1 min，72℃延伸1 min，共30個(gè)循環(huán);最后

3、72℃延伸7 min。
　　(2) cpDNA-PCR反應(yīng)引物篩選
　　篩選出適合于觀光木分子譜系地理學(xué)分析的cpDNA引物:psbJ-petA、trnHGUG-psbA和3'rps16-5'trnK，確定了各對(duì)引物最適退火溫度。
　　(3)觀光木種群分子譜系地理學(xué)分析
　　cpDNA-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的序列比對(duì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3對(duì)葉綠體DNA非編碼序列片段共檢測(cè)出9種單倍型，其中，單倍型H1分布最為廣泛。DNASP5.

4、10軟件分析顯示，種群核苷酸多樣性(π)為0.00043，單倍型多樣性（Hd）為0.26196;種群內(nèi)平均遺傳多樣性(HS)為0.15636，總的遺傳多樣性（HT）為0.40309，觀光木cpDNA變異具有顯著的譜系地理結(jié)構(gòu)(NST=0.67280，GST=0.37275，NST＞GST)。分子方差分析(AMOVA)結(jié)果顯示，種群間遺傳變異為60.19％，種群內(nèi)遺傳變異為39.81％，種群間遺傳分化明顯（FST=0.60190）。巢式支