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文檔簡介
1、觀光木(Tsoongiodendron odorum Chun)為木蘭科(Magnoliaceae)植物,是我國古老的孑遺樹種,被列為我國二級重點(diǎn)保護(hù)植物,對研究古代植物區(qū)系、古地理及古氣候具有重要的科學(xué)價值。本學(xué)位論文對采集于南嶺山地6個省(區(qū))21個觀光木天然種群161個個體,采用葉綠體DNA非編碼區(qū)序列標(biāo)記開展分子譜系地理學(xué)研究,旨在探討觀光木種群進(jìn)化及其瀕危機(jī)制,為科學(xué)制定觀光木遺傳資源保護(hù)方案提供種群遺傳學(xué)背景。主要研究結(jié)果如
2、下:
(1) cpDNA-PCR反應(yīng)體系優(yōu)化
采用單因素及正交試驗設(shè)計,建立了觀光木cpDNA-PCR最優(yōu)反應(yīng)體系(20μL):50 ng模板DNA、1×PCR buffer、引物各0.2μmol·L-1、2.0 mmol·L-1MgCl2、0.3 mmol·L-1dNTP、1 UTaq DNA聚合酶。擴(kuò)增反應(yīng)程序:80℃預(yù)變性5 min;95℃變性1 min,退火1 min,72℃延伸1 min,共30個循環(huán);最后
3、72℃延伸7 min。
(2) cpDNA-PCR反應(yīng)引物篩選
篩選出適合于觀光木分子譜系地理學(xué)分析的cpDNA引物:psbJ-petA、trnHGUG-psbA和3'rps16-5'trnK,確定了各對引物最適退火溫度。
(3)觀光木種群分子譜系地理學(xué)分析
cpDNA-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的序列比對結(jié)果發(fā)現(xiàn),3對葉綠體DNA非編碼序列片段共檢測出9種單倍型,其中,單倍型H1分布最為廣泛。DNASP5.
4、10軟件分析顯示,種群核苷酸多樣性(π)為0.00043,單倍型多樣性(Hd)為0.26196;種群內(nèi)平均遺傳多樣性(HS)為0.15636,總的遺傳多樣性(HT)為0.40309,觀光木cpDNA變異具有顯著的譜系地理結(jié)構(gòu)(NST=0.67280,GST=0.37275,NST>GST)。分子方差分析(AMOVA)結(jié)果顯示,種群間遺傳變異為60.19%,種群內(nèi)遺傳變異為39.81%,種群間遺傳分化明顯(FST=0.60190)。巢式支
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