丁苯酞通過SIRT1-BDNF-TrKB通路改善血管性認(rèn)知障礙的研究.pdf

1、目的:血管性認(rèn)知障礙（vascular cognitive impairment, VCI）是一種由于腦血管受損而導(dǎo)致的以學(xué)習(xí)、記憶等認(rèn)知功能下降為主的臨床綜合癥。海馬神經(jīng)元與人的學(xué)習(xí)、記憶等認(rèn)知障礙息息相關(guān)，海馬神經(jīng)元受損在血管性認(rèn)知障礙的發(fā)病過程中起到至關(guān)重要的作用。SIRT1（Silentinformation re gular1，沉默信息調(diào)節(jié)因子1）是一種NAD+依賴性去乙?；?，成人海馬、大腦皮質(zhì)中表達(dá)較高，與退行性神經(jīng)病變有

2、關(guān)，具有一定的抗老化、抗衰老等神經(jīng)元保護(hù)作用，作用機(jī)制仍有待于進(jìn)一步研究。BDNF（brain-derived neurotrophic factor，腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子）是分布廣泛的神經(jīng)保護(hù)性蛋白。BDNF及其受體TrKB(tropomyosin receptor kinaseB)在海馬中表達(dá)明顯，BDNF主要是通過其受體TrkB發(fā)揮作用，改善神經(jīng)細(xì)胞功能。腦缺血致神經(jīng)損傷后，BDNF及其受體TrkB在海馬區(qū)的表達(dá)下降，認(rèn)知功能明顯下

3、降。目前針對SIRT1和BDNF-TrKB在血管性認(rèn)知障礙的發(fā)生和調(diào)控方面的研究尚無明確結(jié)論。丁苯酞(3-n-butylphthalide，NBP)是一種我國自主研發(fā)的提取自芹菜籽的新型藥物，在急性缺血性腦血管疾病的治療中有明顯療效。丁苯酞保護(hù)神經(jīng)元，改善血管性認(rèn)知功能障礙的作用需進(jìn)一步研究。本研究主要是建立成功的VCI動(dòng)物模型，觀察丁苯酞對VCI大鼠的學(xué)習(xí)、記憶等認(rèn)知功能損害的保護(hù)作用;針對丁苯酞是否通過調(diào)控SIRT1/BDNF-Tr

4、KB通路進(jìn)而發(fā)揮對VCI的修復(fù)和神經(jīng)保護(hù)作用進(jìn)行深入探討。
　　研究方法:將SD大鼠隨機(jī)分為6組:正常對照組（Control組）、模型組(Model組)、丁苯酞低劑量組（30mg/kg.d，L-NBP）、丁苯酞高劑量組（60mg/kg.d，NBP組）、丁苯酞+SIRT1抑制劑組（S+N組）、丁苯酞+BDNF-TrKB抑制劑組（B+N組）。通過側(cè)腦室給藥方法分別給與SIRT1抑制劑和BDNF-TrKB抑制劑。通過永久結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈

5、的方法即兩血管法（bilateral common carotid artery occlusion,2VO），建立VCI動(dòng)物模型。造模4周后通過Morris水迷宮進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)和定位航行實(shí)驗(yàn)檢測大鼠的行為學(xué)變化;通過HE染色和尼氏染色觀察大鼠海馬神經(jīng)元的病理形態(tài)變化;通過Western blot方法檢測大鼠海馬組織中SIRT1和BNDF蛋白含量變化;采用免疫熒光法檢測海馬中SIRT1和BNDF的陽性細(xì)胞表達(dá)。
　　結(jié)果:

6、>　　1.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果:定位航行實(shí)驗(yàn)中，與Control組比較，其他各組大鼠的逃避潛伏期均延長，Model組延長最明顯，兩丁苯酞組優(yōu)于Model組。L-NBP組與NBP組比較，后者優(yōu)于前者，組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)?？臻g探索實(shí)驗(yàn)中，Control組以外各組大鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間均短于Control組，Control組＞NBP組＞L-NBP組＞Model組，組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.H

7、E染色:Control組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞排列整齊，規(guī)則致密，形態(tài)完好，胞漿豐富，細(xì)胞核大而完整，核仁清楚。其余各組均有錐體細(xì)胞減少缺失，細(xì)胞形態(tài)改變，細(xì)胞核固縮、溶解等，Model組最為嚴(yán)重，S+N組和B+N組也很明顯，兩丁苯酞組細(xì)胞破壞情況減輕，L-NBP組不如NBP組明顯。
　　3.尼氏染色:Control組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞整齊，形態(tài)完好，胞漿尼氏體豐富。其他各組海馬區(qū)均有不同程度細(xì)胞腫脹、空泡樣改變，尼氏體減少。Model組

8、最為嚴(yán)重，S+N組和B+N組也較為嚴(yán)重，NBP組和L-NBP組情況好轉(zhuǎn)，NBP組尼氏體數(shù)量大于L-NBP組，各組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.Western Blot: Model組SIRT1和BDNF蛋白含量下降最為明顯，L-NBP組和NBP組中上述兩種蛋白含量表達(dá)高于Model組且仍低于Control組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。S+N組和B+N組中兩種蛋白含量均下降明顯，B+N組中SIRT1含

9、量高于其在S+N組中的蛋白含量，各組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.免疫熒光:與Control組比，其他組的海馬細(xì)胞中兩種陽性細(xì)胞表達(dá)均下降。NBP組較Model組陽性細(xì)胞表達(dá)有所增加但仍低于Control組。兩種陽性細(xì)胞表達(dá)在S+N組中均明顯下降，但是B+N組中BDNF陽性細(xì)胞表達(dá)下降嚴(yán)重，而SIRT1陽性細(xì)胞表達(dá)高于其在S+N組中的表達(dá)。各組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.通