Suramin作為預防艾滋病多效殺微生物劑的研究.pdf

1、研究背景:
　　艾滋病(Acquired immunodeficiency sydrom，AIDS)是由人類免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus type1，HIV-1)引起的一種免疫能力喪失的傳染性疾病，嚴重威脅著人類的生命和健康。全球范圍內(nèi)，新感染病例數(shù)居高不下，其中80％新感染病例來自性傳播，性傳播已成為HIV-1最主要的傳播途徑。殺微生物劑是種有效預防HIV-1性傳播的重要手段。但迄今為止

2、，仍未開發(fā)出有效的殺微生物劑。精液來源的病毒增強因子(SEVI)能削弱殺微生物劑的抗病毒活性同時顯著促進病毒的感染。SEVI是前列腺酸性磷酸酶(PAP)裂解的多肽片段PAP248-286自我組裝形成的淀粉樣纖維。SEVI的陽離子特性能消除病毒和細胞的靜電排斥，增大病毒和靶細胞接觸幾率，從而增強HIV-1感染。因此，SEVI是殺微生物劑的一個重要靶點。前期研究表明，HIV-1進入抑制劑ADS-J1既能拮抗SEVI，與抗病毒藥物合用具有協(xié)同

3、抗病毒效果。但由于ADS-J1具有潛在的致癌性，限制了它的臨床應用。在ADS-J1類似物中篩選到一個本身具有抗HIV-1活性的化合物Suramin，它是臨床治療錐蟲病的經(jīng)典老藥，具有強大的藥理活性:抑制蛋白酶和阻斷生長因子等。前期研究表明，Suramin能抑制多肽PAP248-286形成SEVI，本文將深入研究Suramin抑制及拮抗SEVI的作用及機制;由于Suramin本身具有抗HIV-1活性，也將探討其與抗病毒藥物合用協(xié)同抗病毒效

4、果，期望將Suramin開發(fā)為殺微生物劑或其輔助用藥，更好地預防HIV-1性傳播。
　　研究目的:
　　從具備拮抗HIV-1性傳播過程作用多靶點能力的角度闡述Suramin用于預防HIV-1性傳播的新的可能及機制，從老藥新用的角度尋求擴大Suramin臨床適應癥，為預防HIV-1性傳播的殺微生物劑研發(fā)提供新的研究思路。
　　研究方法:
　　1.剛果紅染色、透射電鏡、激光共聚焦顯微鏡、圓二色譜、Western bl

5、ot和病毒感染實驗方法檢測Suramin對SEVI形成及纖維本身的影響。
　　2.病毒感染實驗檢測Suramin合用抗逆轉錄病毒藥物(ARVs)的抗病毒效果。
　　3.XTT法檢測Suramin對生殖道和淋巴細胞的毒性作用。通過家兔陰道粘膜刺激性實驗，Suramin凝膠劑進行安全性初步評價，其中包括組織病理學檢查、ELISA法檢測陰道灌洗液細胞因子表達水平和PCNA免疫組化評價家兔陰道組織的炎癥。
　　4.多肽PAP2

6、48-286與Suramin進行分子動力學(MD)模擬，從分子動力學角度證明Suramin抑制SEVI形成機制。
　　研究結果:
　　1.Suramin能濃度依賴性抑制多肽PAP248-286纖維化;Suramin能結合SEVI，阻斷它和HIV-1的結合，降低SEVI促進HIV-1的感染能力。
　　2.Suramin在精液中聯(lián)合ARVs可以抑制CCR5受體和CXCR4受體嗜性HIV-1，50％抑制率時的聯(lián)合指數(shù)CI值范

7、圍為0.233～0.739。
　　3.Suramin在體外對生殖道細胞和淋巴細胞基本沒有毒性作用，它對各細胞系的CC50均大于1000μM。組織病理學檢查結果顯示Suramin凝膠組的陰道粘膜上皮細胞均較完整，固有層組織僅輕度水腫;Suramin凝膠不會促進炎癥因子的釋放;Suramin凝膠組的陰道上皮細胞和基質(zhì)細胞PCNA陽性表達率與生理鹽水組無顯著性差異。
　　4.MD模擬表明分子結構非常相似的3個化合物與PAP248-

8、286結合模式不同，分子結構趨向于立體的Suramin能把PAP248-286完全包裹住，另外其改變PAP248-286單體結構的程度最大;Suramin幾乎與PAP248-286上所有的氨基酸有氫鍵或疏水作用:氫鍵有19個，疏水作用數(shù)為45。
　　研究結論:
　　1.Suramin能緊密結合多肽PAP248-286，抑制其自我聚合形成淀粉樣纖維SEVI。
　　2.Suramin阻斷SEVI和HIV-1結合，拮抗其增強