長角血蜱唾液腺功能蛋白發(fā)掘與吸血適應(yīng)機(jī)制研究.pdf

1、蜱是一種專性吸血的外寄生節(jié)肢動(dòng)物，可攜帶并傳播多種病原體，造成人、畜患上疾病甚至死亡，嚴(yán)重影響人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展。長角血蜱Haemaphysalis longicomis隸屬于硬蜱科Ixodidae血蜱屬Haemaphysalis，該物種分布廣泛，數(shù)量眾多，危害性極大。長角血蜱為完成整個(gè)生活史需要吸食大量宿主血液，其中唾液腺作為重要器官，可分泌多種促進(jìn)吸血和消化的活性分子，幫助長角血蜱完成正常的吸血活動(dòng)。研究唾液腺不同吸血時(shí)期蛋白差異

2、表達(dá)對(duì)于闡明長角血蜱的唾液腺吸血的分子機(jī)制，進(jìn)而全面揭示長角血蜱的生存適應(yīng)對(duì)策具有重要意義。
　　本實(shí)驗(yàn)利用第二代測序技術(shù)對(duì)長角血蜱雌蜱饑餓期、交配前吸血期、交配后半飽期和飽血期的四個(gè)吸血階段進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序。測序并合并組裝，共產(chǎn)生87825條Unigene，其中長度在1Kb以上的Unigene有13222條，進(jìn)行功能注釋，共注釋29109條Unigene。利用該轉(zhuǎn)錄組序列作為數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行長角血蜱唾液腺4個(gè)不同吸血時(shí)期所有蛋白質(zhì)的定

3、量蛋白質(zhì)組學(xué)研究。最終通過基于iTRAQ的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，以長角血蜱4個(gè)不同吸血時(shí)期的唾液腺蛋白作為研究對(duì)象，鑒定到表達(dá)差異蛋白3223條，其中具有注釋信息的蛋白3164條，未注釋蛋白59條。利用生物信息學(xué)方法對(duì)差異表達(dá)蛋白進(jìn)行系統(tǒng)分析，最終發(fā)現(xiàn)了眾多與調(diào)控促進(jìn)吸血蛋白表達(dá)和運(yùn)輸相關(guān)的蛋白，我們挑選了其中一些重要蛋白進(jìn)行了RNA干擾，例如驅(qū)動(dòng)蛋白、動(dòng)力蛋白、網(wǎng)格蛋白、分選蛋白、半乳糖激酶和腺苷酰硫酸激酶，最終發(fā)現(xiàn)驅(qū)動(dòng)蛋白和動(dòng)力蛋白被

4、干擾后，雌蜱吸血受到明顯抑制，導(dǎo)致其過早從宿主體表脫落甚至死亡。通過功能分析，我們推測兩種蛋白在長角血蜱吸血功能分子運(yùn)輸過程中起著重要作用。
　　本論文利用定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法對(duì)長角血蜱不同吸血時(shí)期唾液腺蛋白進(jìn)行研究，并結(jié)合研究結(jié)果篩選到能明顯影響雌蜱吸血的兩種蛋白——驅(qū)動(dòng)蛋白和動(dòng)力蛋白，這兩種蛋白也是首次在長角血蜱中得到報(bào)道。實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)于闡明長角血蜱唾液腺生理變化的分子機(jī)制以及長角血蜱適應(yīng)吸血的分子機(jī)制具有重要意義，對(duì)于通過分子手