黃芪丹參配伍改善微血管病變（虛瘀）與調(diào)節(jié)AQP1效應(yīng)的研究.pdf

1、微血管?。∕icrovascular Diseases）是由于缺血（氧）、氧化應(yīng)激、自身免疫等多種多樣的病因?qū)е挛⒀芗捌渲車M織的形態(tài)、結(jié)構(gòu)以及功能異常，進(jìn)而引起組織器官損傷。常見(jiàn)微血管病變（Pathology of Microvascular，P-Mvc）的表現(xiàn)為：1、微血管運(yùn)動(dòng)功能及結(jié)構(gòu)異常：內(nèi)皮細(xì)胞損傷等；2、微血流異常：紅細(xì)胞聚集、血小板聚集和微小血栓形成、全血或血漿粘滯性增高。微血管壁的基本成分有[1]：內(nèi)皮細(xì)胞、基底膜、外

2、周細(xì)胞以及平滑肌細(xì)胞。位于血管腔表面的血管內(nèi)皮細(xì)胞（Vascular endothelial cell，VEC）屬于單層細(xì)胞，不僅是血液與血管壁之間的重要屏障、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)通道，還是內(nèi)分泌器官，對(duì)于血管中血液的流動(dòng)性以及血管的舒縮功能具有不可替代的調(diào)節(jié)作用。VEC損傷在動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、糖尿病、腦血管疾病等病理過(guò)程中起著非常重要的作用。已有研究證實(shí)，微血管病變的發(fā)生中伴隨著VEC損傷，VEC是微血管病變的核心病變位點(diǎn)。
　　中醫(yī)理

3、論認(rèn)為“氣為血之帥，血為氣之母”，氣虛則不能推動(dòng)血的運(yùn)行，脈絡(luò)瘀阻，瘀阻日久，氣亦隨之而郁滯，耗傷氣血。而氣血的運(yùn)行又與脈的功能狀態(tài)密切相關(guān)。脈為“血府”；保持脈道的完整性以及暢達(dá)性是保證氣血能夠進(jìn)行正常運(yùn)行的重要前提?，F(xiàn)代研究表明，中醫(yī)的“脈”與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的VEC較之其他臟腑組織具有更強(qiáng)的相關(guān)性，氣虛血瘀證的發(fā)病原因也與VEC密切相關(guān)?！熬貌《嗵摱囵觥?，VEC損傷日久，微血管病變相關(guān)因子之間平衡持續(xù)失調(diào)，患者體內(nèi)往往會(huì)存在血瘀的現(xiàn)象，呈

4、現(xiàn)不同水平的舌質(zhì)紫暗，舌下靜脈怒張等。《素問(wèn)·調(diào)經(jīng)論篇》云[2]“病在脈、調(diào)之血，病在血、調(diào)之絡(luò)”?？梢罁?jù)益氣活血法的原則來(lái)辨治微血管病變。
　　水通道蛋白（Aquaporins，AQPs）是一組膜通道蛋白家族，參與跨膜水轉(zhuǎn)運(yùn)，已發(fā)現(xiàn)AQP0~AQP12，共13種。AQP1是至今唯一發(fā)現(xiàn)在內(nèi)皮能夠表達(dá)的AQPs，在微血管內(nèi)皮中具有很高的表達(dá)（除了腦），可以起到非常重要的作用。研究表明AQP1不僅參與了高效跨膜水轉(zhuǎn)運(yùn)，還與血管的形成

5、、內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、血管舒縮等功能相關(guān)?？梢?jiàn)，AQP1與VEC的功能密切相關(guān)。
　　黃芪與丹參是臨床上常用的具有“益氣活血”功效的代表藥對(duì)?，F(xiàn)代研究證實(shí)，黃芪與丹參均可保護(hù)VEC。本文旨在探討黃芪丹參不同配伍對(duì)微血管病變的改善作用及其機(jī)制，同時(shí)研究了黃芪丹參不同配伍對(duì)微血管病變大鼠肺臟以及腎臟AQP1表達(dá)的調(diào)節(jié)作用?，F(xiàn)將研究結(jié)果匯報(bào)如下：
　　第一部分：黃芪丹參配伍對(duì)微血管病變大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用
　　目的：

6、>　　1、應(yīng)用限食、游泳及皮下注射腎上腺素的方法制造氣虛血瘀證大鼠模型。
　　2、氣虛血瘀證時(shí)存在微血管病變，黃芪丹參配伍對(duì)微血管病變是否存在改善作用。
　　方法：
　　將70只SD雄性大鼠隨機(jī)分配成7組，對(duì)照組、模型組、丹參組、黃芪組、黃芪丹參（1:1）組、黃芪丹參（2:1）組、黃芪丹參（4:1）組。除對(duì)照組外，所有大鼠進(jìn)行限食、游泳及皮下注射腎上腺素，根據(jù)大鼠體重情況、精神狀態(tài)、舌質(zhì)、毛發(fā)等一般情況的改變及血液流變

7、學(xué)變化，判斷造模是否成功。使用ELISA方法來(lái)檢測(cè)大鼠血漿中內(nèi)皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）、血栓素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素-F1α（6-keto-PGF1α）含量。
　　結(jié)果：
　　模型組大鼠血液流變學(xué)參數(shù)和微血管病變相關(guān)因子與對(duì)照組比較，所產(chǎn)生的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與黃芪丹參（1:1）組、黃芪丹參（4:1）組比較，黃芪丹參（2:1）組血液流變學(xué)參數(shù)顯著下降（ P＜0.05）， NO、6-

8、keto-PGF1ɑ、6-keto-PGF1ɑ/TXB2顯著升高（P＜0.05），TXB2明顯降低（P＜0.05）。與黃芪丹參（4:1）組比較，黃芪丹參（2:1）組ET-1明顯降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、應(yīng)用限食、游泳及皮下注射腎上腺素的方法成功建立氣虛血瘀證大鼠模型；
　　2、氣虛血瘀證大鼠存在微血管病變，黃芪丹參配伍可以改善微血管病變，其機(jī)制與
　　通過(guò)改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能或者結(jié)構(gòu)有關(guān)；其中以

9、黃芪丹參（2:1）組最佳。
　　第二部分：黃芪丹參配伍對(duì)微血管病變大鼠肺損傷及肺組織AQP1表達(dá)的調(diào)節(jié)作用
　　目的：
　　通過(guò)黃芪丹參配伍對(duì)于微血管病變大鼠肺組織損傷的改善及對(duì)AQP1表達(dá)的調(diào)節(jié)，驗(yàn)證黃芪丹參配伍通過(guò)上調(diào)AQP1的表達(dá)減輕微血管病變大鼠肺組織損傷。
　　方法：
　　造模及分組方法同上。取大鼠肺組織，進(jìn)行肺組織濕質(zhì)量／干質(zhì)量（W/D）測(cè)定；用HE染色法對(duì)肺組織病理形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察；用Weste

10、rn blot檢測(cè)方法分析肺組織AQP1蛋白表達(dá)量；運(yùn)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)方法檢測(cè)各組肺組織的AQP1表達(dá)。結(jié)果：
　　肺組織W/D結(jié)果顯示：模型組相比于對(duì)照組肺組織W/D有了明顯增加（P＜0.05）；與其他各用藥組相比，黃芪丹參（2:1）組W/D明顯降低（P＜0.05）；HE染色結(jié)果：模型組：肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張、淤血，肺泡壁出現(xiàn)廣泛增厚，部分肺泡出現(xiàn)擴(kuò)張，組織可見(jiàn)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；黃芪丹參（2:1）組：幾乎接近對(duì)照組。AQP1表達(dá)：

11、在肺組織中，模型組AQP1表達(dá)量明顯下降（P＜0.05）。將黃芪丹參（2:1）組與其他各用藥組作比較，所表達(dá)出的AQP1量明顯升高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　黃芪丹參配伍能夠減輕微血管病變大鼠肺組織損傷，其機(jī)制可能與上調(diào)大鼠肺組織AQP1的表達(dá)有關(guān)。
　　第三部分：黃芪丹參配伍對(duì)微血管病變大鼠腎損傷及腎組織AQP1表達(dá)的調(diào)節(jié)作用
　　目的：
　　通過(guò)黃芪丹參配伍對(duì)微血管病變大鼠腎組織損傷的改善及對(duì)A

12、QP1表達(dá)的調(diào)節(jié)，驗(yàn)證黃芪丹參配伍通過(guò)上調(diào)AQP1表達(dá)改善微血管病變大鼠腎組織損傷。
　　方法：
　　造模及分組方法同上。用HE染色法對(duì)腎組織病理形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察；用Western blot檢測(cè)方法分析腎組織AQP1蛋白表達(dá)量；用免疫組織化學(xué)檢測(cè)方法檢測(cè)各組腎組織的AQP1表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　HE染色結(jié)果：模型組：腎小球囊腔消失，腎小球中毛細(xì)血管擴(kuò)張，球內(nèi)可見(jiàn)大量紅細(xì)胞淤積，腎組織中可見(jiàn)大量腎小管管腔擴(kuò)張，可見(jiàn)