乙腦減毒疫苗與兒童重癥肌無力發(fā)病相關分子病理機制研究.pdf

1、目的：既往研究報道疫苗免疫可能是誘發(fā)自身免疫病的原因，本研究旨在探索疫苗接種是否是中國兒童重癥肌無力多發(fā)的原因,并通過動物實驗探索其分子機制。
　　方法：對BALB/c小鼠4次免疫乙型腦炎減毒活疫苗,乙型腦炎滅活疫苗,乙型肝炎疫苗,百日咳、白喉、破傷風三聯(lián)疫苗，麻疹、流行性腮腺炎、風疹三聯(lián)疫苗、卡介苗和PBS緩沖液，然后用衣架懸掛實驗和測力計觀察實驗小鼠疫苗接種后肌力，ELISA檢測血清乙酰膽堿受體抗體，對小鼠坐骨神行肌電圖重復電

2、刺激，以及免疫熒光觀察小鼠肌肉神經肌肉接頭IgG和C3的沉積。然后用乙型腦炎減毒活疫苗全段蛋白序列與乙酰膽堿受體α亞基進行BLAST蛋白序列對比，尋找與乙酰膽堿受體存在相似蛋白序列的疫苗蛋白。重組表達乙型腦炎減毒活疫苗RdRp蛋白，用重組表達RdRp蛋白免疫BALB/c小鼠，然后用衣架懸掛實驗和測力計觀察實驗小鼠疫苗接種后肌力，ELISA檢測血清乙酰膽堿受體抗體，斑點印跡實驗驗證交叉免疫反應，T細胞增殖實驗觀察AChR能否誘導重組蛋白免

3、疫老鼠脾臟T細胞增殖，并進行肌電圖RNS檢測以及免疫熒光法觀察小鼠肌肉神經肌肉接頭IgG和C3的沉積。
　　結果：乙型腦炎減毒活疫苗免疫小鼠可以誘導小鼠血清產生抗乙酰膽堿受體抗體，并出現(xiàn)小鼠上肢拉力減弱，小鼠衣架懸掛時間變短，部分小鼠肌電圖RNS陽性，及小鼠神經肌肉接頭IgG和C3的沉積。BLAST序列對比乙腦減毒疫苗RdRp蛋與AChR之間存在一個包含7個氨基酸的序列相識度達到86％。重組表達 RdRp蛋白免疫小鼠導致血清產生抗

4、乙酰膽堿受體抗體，斑點印跡實驗也證明RdRp免疫血清能與AChR蛋白反應，同時AChR刺激能誘導RdRp蛋白免疫老鼠脾臟T細胞增殖在細胞水平證明了交叉免疫反應的存在。另外，RdRp蛋白免疫小鼠也會出現(xiàn)上肢拉力減弱，小鼠衣架懸掛時間變短，部分RdRp免疫小鼠肌電圖RNS在5Hz和20Hz都出現(xiàn)波峰下降，并能在小鼠神經肌肉接頭發(fā)現(xiàn)IgG和C3的沉積
　　結論：乙型腦炎減毒活疫苗可以通過其與乙酰膽堿受體α亞基存在相似片段的RDRP蛋白誘