苗藥組方對(duì)COPD大鼠氣道及肺組織c-myc表達(dá)的影響.pdf

1、研究目的:通過(guò)觀察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠氣道重塑模型及正常大鼠氣道及肺組織原癌(C-myc)基因mRNA、蛋白表達(dá)的變化，來(lái)探討C-myc基因與氣道重塑的關(guān)系;并用苗藥組方對(duì)COPD大鼠氣道重塑進(jìn)行干預(yù)，為臨床上治療慢阻肺提供新的治療方向。
　　研究方法:
　　1.80只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(20只)、模型組(60只)。模型組大鼠:COPD造模參考宋一平造模方法，采用熏香煙聯(lián)合氣道內(nèi)滴注脂多糖(LPS)法

2、構(gòu)建，分別于第1天、第14天經(jīng)氣管注入LPS200ug/ul，第2-13天、第15-28天煙熏0.5h，共28d。COPD模型組經(jīng)造模成功后，再隨機(jī)再分為COPD模型組(20只)、苗藥組方干預(yù)組(20只)、地塞米松治療組(20只)，苗藥組方干預(yù)組大鼠于造模成功后給予苗藥組方煎劑灌胃治療，每天2次，每次2ml，地塞米松治療組大鼠腹腔注射地塞米松，1mg/kg/天，療程為30天，上述大鼠分別在造模后各處死6只，處死大鼠后，收集標(biāo)本，取大鼠氣

3、道及肺組織組織進(jìn)行HE染色，并觀察其余各組大鼠的一般狀態(tài)。
　　2.分別運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量法(real-time PCR)進(jìn)行正常對(duì)照組、COPD模型組、苗藥組方干預(yù)組、地塞米松治療組大鼠氣道成纖維細(xì)胞C-myc mRNA含量測(cè)定。
　　3.用免疫組化法檢測(cè)正常對(duì)照組、COPD模型組、苗藥組方干預(yù)組、地塞米松治療組大鼠氣道及肺組織中原癌蛋白的表達(dá)情況。
　　4.用ELISA法檢測(cè)正常對(duì)照組、COPD模型組、苗藥組方干預(yù)組

4、、地塞米松治療組大鼠氣道成纖維細(xì)胞上清液中TGF-β1與PDGF的濃度。
　　結(jié)果:
　　1.COPD模型組大鼠開始出現(xiàn)氣道壁及平滑肌增厚，氣道上皮受損，部分纖毛脫落，氣道周圍及肺泡間隔內(nèi)有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，大鼠支氣管管腔相對(duì)變窄，部分肺泡破壞、融合，肺泡腔擴(kuò)大;苗藥組方干預(yù)組及地塞米松治療組與COPD模型組相比，氣道管腔狹窄程度和肺泡結(jié)構(gòu)破壞程度有減輕。
　　2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time PCR)結(jié)果顯

5、示:與正常對(duì)照組相比較，COPD模型組大鼠氣道成纖維細(xì)胞C-Myc基因mRNA較正常對(duì)照組有顯著的增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與COPD模型組相比，苗藥組方干預(yù)組及地塞米松治療組大鼠氣道成纖維細(xì)胞原癌基因mRNA的表達(dá)量明顯降低。免疫組化結(jié)果顯示:COPD模型組大鼠氣道及肺組織C-Myc蛋白較正常對(duì)照組有顯著地增加。與COPD模型組相比，苗藥組方干預(yù)組及地塞米松治療組大鼠氣道及肺組織原癌蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯降低。
　　3.酶聯(lián)免疫(EL

6、ISA)結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組相比較，COPD模型組大鼠氣道成纖維細(xì)胞上清液中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)及血小板衍生因子(PDGF)的濃度顯著高于正常對(duì)照組，苗藥組方干預(yù)組及地塞米松治療組大鼠氣道成纖維細(xì)胞上清液中TGF-β1及PDGF的濃度顯著低于COPD模型組，其中苗藥組方干預(yù)組與地塞米松治療組大鼠氣道成纖維細(xì)胞上清液中TGF-β1及PDGF的濃度相比較，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　1.COPD大鼠氣道重塑這一病