人外泌汗腺三維重建過程中細(xì)胞增殖與分化的研究.pdf

1、目的：
　　l、在汗腺組織三維重建過程中，通過檢測角蛋白和α-SMA在不同時(shí)間點(diǎn)的變化，來探討外泌汗腺細(xì)胞的發(fā)育和分化情況。
　　2、明確汗腺組織三維重建過程中細(xì)胞增殖的變化及增殖細(xì)胞的類型。
　　方法：將原代培養(yǎng)的汗腺細(xì)胞與Matrigel混合制成細(xì)胞混懸液注射至裸鼠腹股溝區(qū)的皮下組織中，制作汗腺細(xì)胞體內(nèi)三維培養(yǎng)的模型。在接種后的不同時(shí)間點(diǎn)，1-8天及2-6周，將膠栓取出進(jìn)行免疫熒光染色。l、檢測 K7、K8、α-S

2、MA、K5、K14、K15。2、檢測Ki67，并且計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)膠栓的Ki67標(biāo)記指數(shù)。在第4,5和6周膠栓中，通過用Ki67/K7, Ki67/K14和 Ki67/α-SMA這三對抗體行免疫熒光雙染色，來鑒別增殖細(xì)胞的類型。
　　結(jié)果：
　　l、在汗腺組織三維重建過程中，角蛋白和α-SMA的表達(dá)隨體內(nèi)培養(yǎng)時(shí)間不同而改變。在體內(nèi)培養(yǎng)第1天，所有細(xì)胞均表達(dá)K5、K14且呈強(qiáng)陽性，K15表達(dá)呈弱陽性， K7、K8和 alpha-

3、SMA無表達(dá)。隨著時(shí)間的推移，在形成的類球型三維結(jié)構(gòu)中的內(nèi)層出現(xiàn)K7和K8的表達(dá)，但失去K5和K14的表達(dá)，外層出現(xiàn)α-SMA的表達(dá)，但失去K15表達(dá)。K8表達(dá)首先出現(xiàn)在第14天，K7及alpha-SMA出現(xiàn)在第21天。K15、 K14、K5分別在第14天、第21天和第28天開始消失。在培養(yǎng)至4、5和6周時(shí)，類球型結(jié)構(gòu)形成具有類分泌部及曲導(dǎo)管狀結(jié)構(gòu)，可以通過免疫組化來區(qū)分開來。
　　2、汗腺細(xì)胞在體內(nèi)培養(yǎng)第1天時(shí)Ki67的標(biāo)記指數(shù)

4、是30.53?2.47％，在培養(yǎng)至第2天時(shí)，Ki67的標(biāo)記指數(shù)迅速達(dá)到一個(gè)峰值81.43±5.44%。隨后，隨著汗腺細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間的延長，Ki67的標(biāo)記指數(shù)逐步下降，在第6周時(shí)降至最低2.87±1.27%。免疫熒光雙染色顯示：K14/Ki67雙染色細(xì)胞占Ki67陽性細(xì)胞的80%，而K7/Ki67和α-SMA/Ki67雙染色細(xì)胞僅占Ki67陽性細(xì)胞的10%。
　　結(jié)論：
　　l、在汗腺重建過程中，角蛋白和α-SMA表達(dá)的變化與人