紅樹林耐酸微生物分離純化條件優(yōu)化及四葉參催乳作用的研究.pdf

1、本研究分為二部分：
　　第一部分：紅樹林耐酸微生物分離純化條件優(yōu)化研究
　　目的：對(duì)13個(gè)?？跂|寨港根泥樣品進(jìn)行微生物的分離與純化，篩選出最適宜該地區(qū)土壤微生物生長的預(yù)處理方法、培養(yǎng)基、稀釋梯度及酸堿度。
　　方法：采用等比稀釋法將樣品稀釋為10-1-10-5不同等級(jí)梯度，以梯度稀釋法、風(fēng)干法和差速離心法作為預(yù)處理方法分離真菌和放線菌，根據(jù)碳源、氮源及微量元素的不同配比配制培養(yǎng)基，采用pH3和pH7兩個(gè)酸堿度，以期分離

2、得到更多的微生物。最后通過形態(tài)特征和TLC特征比對(duì)菌株進(jìn)行排重。
　　結(jié)果：共得真菌77株，放線菌84株。其中真菌通過梯度稀釋法得到72株，風(fēng)干法得4株，差速離心法得1株，因此，最優(yōu)處理方法為梯度稀釋法；不同稀釋梯度下，10-1得60株，10-2得6株，10-3得3株，10-4得5株，10-5得3株，故10-1條件下分離此真菌最為適宜；不同pH條件下，pH7條件下得到43株，pH3條件下得到29株，所以中性條件分離此真菌最適宜；不

3、同培養(yǎng)基條件下，PDA培養(yǎng)基得23株，無機(jī)鹽培養(yǎng)基得13株，麥芽培養(yǎng)基得13株，GYP培養(yǎng)基得13株，馬丁培養(yǎng)基得10株，因而PDA培養(yǎng)基最適合分離此真菌。在84株放線菌中，梯度稀釋法得到82株，風(fēng)干法得2株，故梯度稀釋法最適合分離此真菌；不同稀釋梯度中10-1得64株，10-2得19株，10-3得1株，所以最優(yōu)稀釋梯度為10-1；不同pH條件下，中性條件下得到78株，酸性條件下得到6株，因此，中性條件最佳；不同培養(yǎng)基條件下，無機(jī)鹽培養(yǎng)

4、基得37株，麥芽培養(yǎng)基得17株，PDA培養(yǎng)基得13株，GYP培養(yǎng)基得9株，馬丁培養(yǎng)基得6株，所以無機(jī)鹽培養(yǎng)基最適合。
　　結(jié)論：分離本實(shí)驗(yàn)中?？跂|寨港地區(qū)的土壤微生物，最適宜采用梯度稀釋法，在中性條件下且稀釋梯度較小時(shí)最佳。分離放線菌可采用無機(jī)鹽培養(yǎng)基，真菌則適宜用PDA培養(yǎng)基。
　　第二部分：四葉參（四地）水提物對(duì)溴隱亭產(chǎn)后缺乳大鼠的催乳作用研究
　　目的：復(fù)制溴隱亭誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)后缺乳病理模型，從母鼠的泌乳量、仔鼠體重

5、增長率、血清催乳素(PRL)水平以及乳腺和垂體的病理組織學(xué)等角度，比較四葉參（四地）的催乳作用。
　　方法：選用成年健康SD大鼠96只，雌雄比例3：1合籠飼養(yǎng)，18天后，取出雄鼠，同時(shí)將雌鼠單籠飼養(yǎng)。取產(chǎn)仔時(shí)間相差小于24小時(shí)的56只母鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，調(diào)整每只母鼠帶仔8只。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：按母鼠體重隨機(jī)分為：正常組、溴隱亭模型組、四葉參組（貴州組、安徽組、湖南組、山東組）及陽性對(duì)照藥物乳泉顆粒組。除正常組外，各組于產(chǎn)后第2天起溴隱亭灌胃（

6、0.5mg/kg/d），同時(shí)合并給藥(四葉參組15 g/kg/d，陽性對(duì)照藥物乳泉顆粒組2.6 g/kg/d)7天。實(shí)驗(yàn)第8天，以酶免法檢測(cè)各組大鼠血清催乳素（PRL）水平，乳腺及垂體切片經(jīng)HE染色，光鏡下觀察其病理組織學(xué)變化，計(jì)算母鼠每日3h泌乳量及仔鼠體重增長率。采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。
　　結(jié)果：1.模型組的母鼠泌乳量、仔鼠體重增長率和催乳素(PRL)水平都低于正常組，差異具有顯著性(p<0.01)，說明

7、復(fù)制母鼠產(chǎn)后缺乳模型成功；四葉參組均能在該劑量下升高上述3指標(biāo)(p<0.05)，證明四葉參能促進(jìn)母鼠泌乳；四產(chǎn)地間比較差異無顯著性(p＞0.05)。2.病理組織學(xué)：正常組大鼠乳腺組織豐富，呈泌乳態(tài)，乳腺小葉分葉明顯，腺泡充盈，腺管擴(kuò)張，腺腔增大，充滿嗜酸性分泌物，腺上皮呈柱狀，多見初乳小葉；模型組大鼠乳腺主要由脂肪組織組成，乳腺小葉分葉不明顯，腺泡稀少、分散，腺腔狹窄，僅個(gè)別可見少量分泌物；四葉參組病理組織學(xué)與正常組類似。正常組大鼠垂體