ADPN-AMPK信號(hào)通路對肥胖型哮喘小鼠氣道的保護(hù)作用及機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　建立肥胖型哮喘動(dòng)物模型，研究肥胖對哮喘氣道炎癥和氣道高反應(yīng)(AHR)的影響及其作用機(jī)制，探討ADPN對肥胖型哮喘氣道炎癥和AHR的保護(hù)作用及可能機(jī)制。
　　方法：
　　80只SPF級(jí)3-4周齡C57BL/6雄性小鼠隨機(jī)分為8組，分別為:正常對照組(A)、哮喘組(B)、哮喘+ADPN組(C)、哮喘+ADPN+compound C組(D)、肥胖組(E)、肥胖型哮喘組(F)、肥胖哮喘+ ADPN組(G)和肥胖哮喘

2、+ADPN+compoundC組(H)，每組各10只。E組、F組、G組及H組予45％高脂飼料喂養(yǎng)，A組、B組、C組及D組則以普通飼料喂養(yǎng);B組、C組、D組、F組、G組及H組小鼠于喂養(yǎng)第9周的第1天和第7天分別經(jīng)腹腔注射0.01％ OVA/Al(OH)3混合液0.1ml致敏，第2532天，每天以1％ OVA懸液進(jìn)行霧化激發(fā)，每次30分鐘;A組和E組則以生理鹽水代替進(jìn)行致敏和激發(fā)。C組、D組、G組及H組于首次激發(fā)前24h和48h予尾靜脈注射

3、ADPN1mg/kg，D組和H組在ADPN前1h經(jīng)小鼠腹腔注射compound C20mg/kg，C和G組予生理鹽水代替。在喂養(yǎng)過程中每2周測量體重1次，末次激發(fā)24h內(nèi)用動(dòng)物肺功能儀測定各組小鼠的氣道阻力;處死小鼠后摘眼球取血，測量體長、稱取肝重、內(nèi)臟脂肪濕重;HE染色觀察肺組織病理改變;BALF沉渣計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)和分類計(jì)數(shù);ELISA法檢測血清及BALF上清液中ADPN、TNF-α水平，ELISA測定肺組織8-OHdG、TAOC及NO

4、水平;qRT-PCR法測定肺組織ADPN mRNA、AdipoR1 mRNA、AdipoR2mRNA、AMPKα1mRNA及AMPKα2mRNA的表達(dá)，Western blot法檢測肺組織AMPKα和pAMPKα、bcl-2、iNOS蛋白及細(xì)胞核蛋白NF-κB p65的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1、體重、體長、肝重及內(nèi)臟脂肪濕重:高脂飲食組體重增長明顯，喂養(yǎng)8周后高脂飲食組小鼠平均體重超過普通飲食組小鼠平均體重的20％(P

5、＜0.01)，達(dá)到肥胖標(biāo)準(zhǔn);高脂飲食組小鼠體長、肝重、內(nèi)臟脂肪濕重與普通飲食組相比明顯升高，差異有顯著性(P＜0.05);
　　2、氣道反應(yīng)性:與A組氣道阻力Rn(0.3620±0.0271)相比，B組、C組、D組、E組、F組、G組及H組Rn基線值均增高，F(xiàn)組(1.3540±0.0301)增高最顯著（P＜0.05）;經(jīng)ADPN預(yù)處理后，C、G組氣道阻力Rn相應(yīng)降低(0.4886±0.0643 vs0.9523±0.0402、0.6

6、517±0.0974 vs1.3540±0.0301)，用compound C阻斷后，氣道阻力Rn較單純ADPN預(yù)處理組升高(0.6661±0.1010 vs0.4886±0.0643、1.0130±0.1665 vs0.6517±0.0974)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;經(jīng)不同濃度乙酰甲膽堿激發(fā)后，各組小鼠氣道阻力Rn均升高， B組、D組、F組、H組明顯升高，與A組、C組、E組、G組、相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;E

7、組較A組氣道阻力升高（P＜0.05）。
　　3、氣道炎癥:與A組氣道炎癥評(píng)分(0.4±0.5164)相比，B組、C組、D組、E組、F組、G組及H組炎癥加重，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;C、G炎癥評(píng)分與B組、D組、F組及H組相比明顯好轉(zhuǎn)（P＜0.05）;
　　4、BALF細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù):與A組[(2.13±0.11)×106]相比，B組、C組、D組、E組、F組、G組及H組小鼠BALF細(xì)胞總數(shù)明顯增加（均P＜0.05）

8、;EOS以B組增高最顯著[(1.97±0.12)×106]，F(xiàn)組EOS、NEU、Mac均明顯升高，ADPN預(yù)處理后降低[(0.71±0.07)vs(1.2±0.04)、(1.65±0.17)vs(2.80±0.10)、(0.94±0.10)vs(1.60±0.05)](P＜0.05)。
　　5、血清及BALF上清液中ADPN、TNF-α的含量:ADPN預(yù)處理后，C組、D組、G組及H組小鼠血清及BALF中ADPN水平明顯增加（P＜0

9、.05);與A組相比，其他組小鼠血清及BALF中TNF-α表達(dá)增高，但C組、G組較B組、F組明顯降低（P＜0.05）;compound C可以阻斷這一效應(yīng)（P＜0.05）;
　　6、各組小鼠肺組織ADPN、AdipoR1、AdipoR2、AMPKα1、AMPKα2 mRNA的表達(dá):ADPN、AdipoR1、AdipoR2、AMPKα1、AMPKα2 mRNA在小鼠肺組織有基礎(chǔ)表達(dá);與A組比較，其他組小鼠肺組織ADPN、Ad ipo

10、R1、AdipoR2 mRNA表達(dá)明顯減少，F(xiàn)組表達(dá)減少最明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）:C、D、G、11組小鼠肺組織ADPN mRNA表達(dá)明顯增加（P＜0.05）;C、D(G、H)組小鼠肺組織AdipoR1、AdipoR2mRNA表達(dá)均B組（F組）增多（均P＜0.05);AMPKα1、AMPKα2 mRNA在各組小鼠肺組織中的表達(dá)無明顯差異（P＞0.05）;
　　7、各組小鼠肺組織中AMPKα和pAMPKα、NF-κ B

11、 p65、bcl-2及iNOS蛋白的表達(dá):AMPKα蛋白在各組小鼠肺組織中表達(dá)無明顯差異(P＞0.05);與A組相比，B組、D組、F組、H組小鼠肺組織pAMPKα蛋白表達(dá)顯著降低，核蛋白NFκ B p65、bc l-2及iNOS蛋白表達(dá)顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;C組pAMPKα、NFκ B p65、bcl-2及iNOS蛋白的表達(dá)與A組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;
　　8、各組小鼠肺組織8-OHdG、TA

12、OC、NO的表達(dá):與A組相比，B組、D組、F組、H組小鼠肺組織8-OHdG、NO表達(dá)顯著增加，TAOC表達(dá)顯著降低（均P＜0.05）;與B組、D組相比，C組小鼠肺組織8-OHdG、NO表達(dá)明顯減少，TAOC表達(dá)增加（均P＜0.05）;與F組及H組相比，G組小鼠肺組織8-OHdG、NO表達(dá)明顯降低，TAOC表達(dá)明顯升高（均P＜0.05）;
　　結(jié)論：
　　1、肥胖型哮喘小鼠氣道反應(yīng)性增高、氣道炎癥加重，與ADPN/AMPK信號(hào)