TLR4-TRIF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在哮喘小鼠氣道黏液高分泌中的作用.pdf

1、第一部分吸入LPS對哮喘小鼠氣道炎癥和氣道黏液分泌的影響
　　 目的：觀察吸入脂多糖(LPS)對哮喘小鼠氣道炎癥和氣道黏液分泌的改變
　　 方法：清潔級(jí)BALB/c小鼠30只隨機(jī)分為三組:哮喘組(AST組)10只、LPS哮喘組(LPS組)10只和正常組(NS組)10只,哮喘組用卵清白蛋白(OVA)致敏和激發(fā)制作哮喘模型,LPS哮喘組在哮喘模型的基礎(chǔ)上加用LPS(50ug/ml)霧化吸入30分鐘,正常組用生理鹽水代替OVA

2、。檢測NS組、AST組及LPS組小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞分類計(jì)數(shù),采用ELISA檢測BALF中的IL-4和TNF-α水平,HE染色觀察肺部病理學(xué)改變,用阿爾辛藍(lán)-過碘酸雪夫(AB-PAS)染色氣道杯狀細(xì)胞,免疫組織化學(xué)法檢測肺組織中黏蛋白5ac(Muc5ac)以及TLR4的表達(dá),熒光定量RT-PCR檢測Muc5acmRNA和TLR4mRNA在肺內(nèi)的表達(dá),Western-blotting檢測氣道m(xù)uc5ac和TLR4

3、蛋白含量。
　　 結(jié)果：AST組及LPS小鼠較Ns組小鼠在BALF中的細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞百分比,IL-4和TNF-α水平、肺組織AB-PAS陽染面積,Muc5ac蛋白和mRNA表達(dá)明顯升高,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。LPS組較AST組在前述氣道炎癥和氣道黏液高分泌指標(biāo)方面明顯增高,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：OVA致敏和激發(fā)的哮喘小鼠出現(xiàn)以嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤

4、為主的氣道炎癥及杯狀細(xì)胞增生的氣道黏液高分泌,且氣道炎癥和氣道黏液高分泌關(guān)系密切。LPS組比AST組在氣道炎癥和氣道黏液高分泌方面明顯加重,可能與LPS激發(fā)了體內(nèi)炎癥介質(zhì)的生成、活化有關(guān)。
　　 第二部分TLR4/TRIF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在哮喘小鼠氣道組織Muc5ac表達(dá)中的作用及Dynasore干預(yù)的影響
　　 目的：觀察Dynasore干預(yù)對LPS哮喘小鼠肺組織TLR4表達(dá)及氣道m(xù)uc5ac表達(dá)的影響,探討TLR4/TR

5、IF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在哮喘小鼠氣道Muc5ac表達(dá)中的作用。
　　 方法：清潔級(jí)BALB/cdx鼠50只隨機(jī)分成LPS哮喘組(LPs組)、多粘菌素B組(PMB組)、Dynasore干預(yù)組(DYN組)、地塞米松干預(yù)組(DEX組)、及溶劑對照組二甲基亞砜組(DMSO組)。每組各10只,PMB組在霧化吸入LPS1小時(shí)之前腹腔注射多粘菌素B(1mg/kg),0.2ml/次,每天一次,連用5天;其余各干預(yù)組予以Dvnasore(1mg/kg)

6、、地塞米松(2mg/kg)、二甲基亞砜(1mg/kg)代替干預(yù)的藥物。測定BALF中細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞分類計(jì)數(shù),采用ELISA檢測BALF中的IL-4和TNF-α水平,通過HE染色觀察肺組織病理學(xué)改變,AB-PAS對氣道杯狀細(xì)胞進(jìn)行染色,用免疫組織化學(xué)法和WB檢測氣道Muc5ac和肺組織TLR4蛋白的表達(dá)及熒光定量RT-PCR檢測Muc5acmRNA、TLR4mRNA、IFN-βmRNA在肺組織內(nèi)的表達(dá)。
　　 結(jié)果：LPS組較DY

7、N組、PMB組、DEX組在BALF細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、IL-4含量、TNF-α水平、AB-PAS陽染面積、免疫組化及WesternBlot檢測Muc5ac和TLR4蛋白表達(dá)、Muc5ac、TLR4、IFN-βmRNA表達(dá)等增高,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。DMSO組與LPS組兩者之間其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：TLR4/TRIF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能介導(dǎo)哮喘小鼠的慢性氣道炎癥反應(yīng)和導(dǎo)致氣道黏