補肺湯通過調控TLR2-NF-κB信號轉導通路改善COPD氣道重塑機制研究.pdf

1、目的：
　　探索補肺湯對COPD穩(wěn)定期大鼠氣道重塑的影響，求證補肺湯是否能通過TLR2/NF-κB信號轉導通路來調節(jié)COPD大鼠免疫功能及抑制其氣道炎癥，為補肺湯的臨床應用提供實驗依據(jù)，從而進一步論證將“補肺益腎”法作為COPD穩(wěn)定期中醫(yī)藥主要治療措施的可行性和重要性，深入理解“肺腎氣虛”這一COPD穩(wěn)定期中醫(yī)證型和“免疫功能低下”及“氣道炎癥”等客觀指標的相關性，加深對COPD穩(wěn)定期本質——肺腎氣虛的認識，促進中醫(yī)證型客觀化、標

2、準化、規(guī)范化，對指導中醫(yī)藥治療COPD的基礎研究和臨床應用均具有重要的意義。
　　方法：
　　將84只大鼠隨機分為7組：假手術組、模型組、中藥補肺湯免煎顆粒劑高劑量組（簡稱免高組）、中藥補肺湯免煎顆粒劑中劑量組（簡稱免中組）、中藥補肺湯免煎顆粒劑低劑量組（簡稱免低組）、中藥補肺湯飲片湯劑組（簡稱湯藥組）、陽性對照西藥孟魯司特鈉組（簡稱西藥組），每組12只。除假手術組外其余各組均在實驗開始后第1天和第25天氣道注射脂多糖，第2

3、—8天、23—24天、26—28天不做任何處理以待大鼠恢復體力，第9—22天、29—36天每天煙熏1次；第37—44天每天煙熏2次，第45—52天每天煙熏3次。假手術組在第1天和第25天氣道注射等量生理鹽水，不予被動吸煙。造模成功后，第二天開始灌胃給藥。假手術組、模型組給予生理鹽水（10ml/kg·d），西藥組給予孟魯司特鈉（1.0mg/kg·d），免高組、免中組、免低組分別給予補肺湯免煎劑（27.8g/kg·d、13.9g/kg·d、

4、7.0g/kg·d），湯藥組給予補肺湯水煎劑（13.9g/kg·d），連續(xù)給藥32天。第33天開始將大鼠股動脈切開，放血處死，取右肺組織觀察其病理學變化，并用免疫組化S-P法檢測TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB蛋白基因的陽性表達，用Western-Blot法檢測肺組織中TLR2、MyD88、NF-κB的含量；取支氣管肺泡灌洗液，用ELISA法檢測支氣管肺泡灌洗液中IL-1β、IL-6、IL-8、NF-κB、TNF-α炎性因子的

5、水平。
　　結果：
　　1.一般情況：假手術組大鼠傷口恢復好，瘢痕小，營養(yǎng)狀況良好，精神正常，目光有神，皮毛色白而光澤度好，活潑好動，反應靈敏，呼吸平穩(wěn)，進食、進水及大便正常，無咳嗽、喘息等表現(xiàn)，未見異常呼吸道分泌物，未聞及哮鳴音；而其余各組在造模過程中逐漸出現(xiàn)營養(yǎng)狀況不佳，活動減少，精神不振，雙目無神，反應遲鈍，進食量少，大便稀溏，皮毛枯槁發(fā)黃，失去光澤，易脫落，并出現(xiàn)倒豎現(xiàn)象，有時口角見分泌物流出，可聞及咳嗽及哮鳴音；各

6、治療組在給藥后上述情況均有所好轉，其中以免高組最為明顯，其次是免中組和西藥組。
　　2.病理學檢查：假手術組大鼠氣管黏膜纖毛柱狀上皮細胞完整，呼吸道及肺泡上皮結構完整，纖毛排列整齊，各級氣管、支氣管可見少量散在的淋巴細胞浸潤，肺泡組織形態(tài)均勻、肺泡間質厚薄適當，肺泡區(qū)極少見到巨噬細胞，支氣管腔中幾乎沒有分泌物和炎癥細胞。模型組大鼠黏膜上皮不完整，氣管、支氣管纖毛上皮部分剝脫、杯狀細胞及腺體顯著增生、肥大，支氣管黏膜皺襞增多、變長，

7、突入管腔；各級支氣管黏膜層、黏膜下層可見以淋巴細胞、巨噬細胞為主的炎細胞浸潤，此外尚有漿細胞和少量中性粒細胞，支氣管平滑肌增厚明顯，小支氣管腔內可見黏液栓及大量中性粒細胞；小支氣管和肺小動脈旁可見大量吞噬了煙塵顆粒的巨噬細胞(塵細胞)，部分巨噬細胞崩解破壞；終末細支氣管遠端狹窄，呼吸性細支氣管及肺泡管囊狀擴張，肺泡腔不規(guī)則擴大，肺泡壁變薄、脹大、破裂或融合形成肺大皰，免高組、免中組、湯藥組與模型組相比，上述病變有所減輕。
　　3.

8、用ELISA法檢測炎性因子：與假手術組相比，模型組大鼠BALF中IL-1β、IL-6、IL-8、NF-κB、TNF-α的含量均有顯著差異。與模型組相比：免高組、免中組、湯藥組、西藥組大鼠BALF中IL-1β的含量有顯著差異；免高組、西藥組、免中組大鼠BALF中IL-6的含量有顯著差異；免高組、湯藥組、西藥組大鼠BALF中IL-8的含量有顯著差異；免高組、西藥組大鼠BALF中NF-κB的含量有顯著差異；免高組、免中組、湯藥組、西藥組大鼠B

9、ALF中TNF-α的含量有顯著差異。
　　4.用免疫組化SP法檢測蛋白基因的陽性表達：與假手術組比較，模型組大鼠肺組織中NF-κB、TLR2、TLR4、MyD88的表達均有顯著差異。與模型組相比：湯藥組、西藥組、免高組大鼠肺組織中NF-κB的表達有顯著差異；湯藥組、西藥組、免高組、免中組大鼠肺組織中TLR2的表達有顯著差異；湯藥組、西藥組、免高組、免中組大鼠肺組織中TLR4的表達有顯著差異；湯藥組、免高組、免中組大鼠肺組織中MyD

10、88的表達有顯著差異。
　　5.用Western-Blot法檢測蛋白含量：與假手術組相比，模型組MyD88、NF-κB、TLR2的含量均有顯著差異。與模型組相比：西藥組、湯藥組、免高組、免中組MyD88的含量有顯著差異；西藥組、湯藥組、免高組、免中組NF-κB的含量有顯著差異；西藥組、免高組、免中組TLR2的含量有顯著差異。
　　結論：
　　1.補肺湯免煎劑、湯劑均可同時抑制COPD大鼠肺組織中TLR2、TLR4兩種T