亞低溫對(duì)脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠肺組織TLR2-MyD88信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響.pdf

1、目的:本研究旨在研究亞低溫(32-34℃)治療對(duì)經(jīng)氣道滴入脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)形成急性肺損傷(acute lung injury，ALI)大鼠Toll樣受體2/髓樣分化因子88(TLR2/MyD88)通路中炎性介質(zhì)及炎性因子變化的影響。包括相關(guān)炎性蛋白纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）、TLR2、MyD88及核轉(zhuǎn)錄因子-κB p65(NF-κB p65)的變化。
　　方法:90只雄性SD大

2、鼠按隨機(jī)數(shù)字表法被分成四組:對(duì)照組、非控溫組、控溫組及亞低溫組。對(duì)照組樣本數(shù)為18，其余各組均為24。將大鼠分離出左勁總動(dòng)脈后置入留置針以備用，第一次抽取動(dòng)脈血行血?dú)夥治?，分離氣管后對(duì)照組滴入生理鹽水，0.5 mL/kg;非控溫組、控溫組及亞低溫組各滴入等量的LPS。氣道滴入后行呼吸機(jī)輔助通氣，1h后第二次抽取動(dòng)脈血行血?dú)夥治霾?duì)亞低溫組及控溫組實(shí)施目標(biāo)性物理降溫，分別控制肛溫為亞低溫組32～34℃、控溫組36～37℃，對(duì)照組及非控溫組

3、不加以干預(yù)。分別于溫度干預(yù)后1h，6h，12h分批處死大鼠，處死前第三次抽取動(dòng)脈血行血?dú)夥治?。取右肺以生理鹽水灌洗收集肺泡灌洗液，后將右肺保存于10％福爾馬林中，并于后期進(jìn)行石蠟切片，光鏡觀察肺組織，進(jìn)行病理改變半定量評(píng)分。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)肺泡灌洗液中PAI-1蛋白表達(dá);將左肺保存于-80℃冰箱，并于后期提取肺組織內(nèi)總RNA及總蛋白，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)TLR2mRNA、MyD88

4、 mRNA表達(dá)，蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(yàn)(Western Blot)檢測(cè)NF-κ B p65蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:1、動(dòng)脈血?dú)夥治?滴入LPS前，各組氧和指數(shù)無(wú)明顯差別;滴入LPS后1小時(shí)，對(duì)照組氧和指數(shù)較滴入前無(wú)明顯變化，急性肺損傷模型組較滴入前及對(duì)比同時(shí)段對(duì)照組明顯下降，提示急性肺損傷模型成功建立;干預(yù)后，同時(shí)段亞低溫組較非控溫組及控溫組氧和指數(shù)改善，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（1h:402.49±38.61比316.15±19.94比324.

5、36±28.93;6h:349.72±98.20比263.22±57.10比284.30±13.68;12h:241.20±15.29比220.25±6.29比233.40±28.64）。2、病理?yè)p傷情況:非控溫組、控溫組及亞低溫組光鏡下觀察見(jiàn)明顯病理?yè)p傷變化，且較對(duì)照組病理半定量評(píng)分顯著下降，為急性肺損傷模型建立成功的金標(biāo)準(zhǔn);同時(shí)段亞低溫組較非控溫組及控溫組評(píng)分下降，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（1h:6.04±0.74比8.17±0.59比7.9

6、6±0.65;6h:9.09±0.80比13.00±0.98比13.13±1.02;12h:10.79±1.42比13.38±1.08比13.42±0.68）。3、肺泡灌洗液中PAI-1表達(dá):PAI-1蛋白表達(dá)(ng/L)于干預(yù)后1、6、12h明顯下降（1 h:121.36±4.62比196.64±16.03比197.74±9.42,6 h:230.53±10.76比300.41±9.75比294.06±16.60,12 h:270.4

7、8±13.20比328.41±15.12比319.40±10.24,均P＜0.01）;4、肺組織中TLR2 mRNA、MyD88 mRNA表達(dá)（2-△△Ct）:較非控溫組及控溫組，亞低溫組TLR2、MyD88的mRNA表達(dá)于干預(yù)后1、6和12 h明顯下降（TLR2 mRNA表達(dá)1h:2.18±0.26比3.07±0.42比3.04±0.39,6h:4.09±0.29比5、06±0.39比4.90±0.25,12h:6.02±0.43比7

8、.26±0.49比7.10±0.54; MyD88 mRNA表達(dá)1h:2.25±0.41比3.14±0.35比3.04±0.30,6h:5.67±0.55比7.20±0.55比7.01±0.76,12h:7.14±0.60比9.17±0.73比8.87±0.54，均P＜0.01)。5、肺組織中NF-κ B p65蛋白變化:較非控溫組及控溫組，亞低溫組NF-κ B p65蛋白表達(dá)（A值）于干預(yù)后6h、12 h明顯下降（6h:0.31±0.