脂肪干細(xì)胞對脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠炎性因子表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景：
　　急性肺損傷(acute lung injury, ALI)/急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)繼發(fā)于嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、誤吸、缺血再灌注、酸中毒等原因，失控的炎癥反應(yīng)二次打擊后肺往往為最早受損的器官，是 ICU中常見的危重病之一，進(jìn)一步發(fā)展可出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸衰竭而危及生命。盡管ALl/ARDS病因不同，但有共同的特征是難治性低氧血癥和進(jìn)行性呼吸窘迫，其

2、確切的發(fā)病機(jī)制目前仍未完全闡明。治療也因原發(fā)病不同變得復(fù)雜，目前臨床中主要采用小潮氣量肺保護(hù)性通氣策略、嚴(yán)格的液體控制管理以及CRRT、ECMO等高端儀器的應(yīng)用，療效有限。雖然在過去的二十年里治療方法及 ICU病房的使用對疾病預(yù)后有所改善，但較高的發(fā)病率和死亡率，治療困難以及高昂的醫(yī)療成本等問題一直困擾著醫(yī)療界，成為全球性重要的公共衛(wèi)生問題。因此迫切尋求新的治療方法來改善現(xiàn)狀，近年來研究發(fā)現(xiàn)具有多向分化潛能和抗炎作用的干細(xì)胞，有望改善這

3、些癥狀。
　　脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells，ADSCs）是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種成體干細(xì)胞，具有來源豐富、取材方便，而且增殖能力強(qiáng)、免疫功能低等優(yōu)點(diǎn)引起人們的廣泛關(guān)注。目前關(guān)于ADSCs在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的ALI方面的研究較少，本研究進(jìn)一步探討ADSCs對LPS誘導(dǎo)急性肺損傷大鼠炎性因子表達(dá)的影響及其抗炎作用機(jī)制。
　　目的：
　　建立用LPS誘

4、導(dǎo)的大鼠ALI模型，EdU標(biāo)記ADSCs后觀察在肺部定植情況，觀察ADSCs對LPS誘導(dǎo)的ALI大鼠的治療作用及炎性因子的影響，進(jìn)一步探討抗炎作用機(jī)制。
　　方法：
　　雄性SD大鼠70只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組（10只）、LPS組（30只）、LPS+ADSCs組（30只）。ADSCs培養(yǎng)至第4代時加入EdU培育24h標(biāo)記干細(xì)胞。腹腔注射LPS8mg/kg制備大鼠ALI模型，LPS+ADSCs組于制模30min后尾靜脈注射

5、300μL ADSCs進(jìn)行干預(yù)；對照組無處理直接取標(biāo)本，其余兩組在6h、24h、72 h取標(biāo)本。股動脈取血檢測動脈血氧分壓（PaO2）及乳酸水平；左心室取血，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測血清髓過氧化物酶（MPO）和白細(xì)胞介素-10（IL-10）水平；開胸取肺組織，檢測肺濕/干質(zhì)量（W/D）比值，光鏡下觀察肺組織病理學(xué)改變，熒光顯微鏡下觀察肺組織EdU標(biāo)記的干細(xì)胞定植情況，用蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(yàn)（Western Blot）檢測肺組織

6、核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　用EdU標(biāo)記的ADSCs通過大鼠尾靜脈注射后6h、24h、72h均有不同程度的在ALI肺部定植。與對照組比較，LPS組6h起肺組織損傷較重，肺W/D比值、血乳酸及血清MPO、IL-10水平和肺組織NF-κB表達(dá)均顯著增加，PaO2顯著下降；與LPS組比較，LPS+ADSCs組6h起肺組織損傷程度明顯減輕，肺W/D比值、血乳酸及血清MPO水平和肺組織NF-κB表達(dá)均明顯降低

7、，PaO2顯著增加，72 h已接近正常對照組水平〔肺W/D比值：6 h為5.33±0.29比5.77±0.42，72 h為5.14±0.46比5.43±0.38；血乳酸(mmol/L)：6 h為3.6±1.0比5.7±1.1，72 h為3.1±1.0比3.8±1.2；血MPO（μg/L）：6 h為1.50±0.90比2.70±1.85，72 h為0.46±0.30比0.71±0.22；血NF-κB（灰度值）：6 h為0.40±0.11比

8、0.50±0.09，72 h為0.24±0.03比0.33±0.06；PaO2（mmHg，1 mmHg＝0.133 kPa）：6 h為78.0±4.1比74.5±3.2，72 h為89.3±9.4比81.9±3.4；均P＜0.05〕，IL-10水平僅24 h顯著高于LPS模型組（ng/L：27.75±15.49比17.52±6.56，P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　ADSCs移植可在ALI大鼠肺部定植，能改善氧合升高PaO