Surfactin對(duì)脂多糖誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌炎性因子的影響.pdf

1、傳統(tǒng)的抗炎藥物對(duì)人體器官和組織均有毒副作用，許多研究表明，surfactin對(duì)機(jī)體損傷較低，不易產(chǎn)生耐藥性，且可提高人體免疫力。本論文以小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象，檢測(cè)surfactin對(duì)巨噬細(xì)胞分泌炎性因子的影響及相關(guān)通路的調(diào)節(jié)作用，揭示surfactin的抗炎活性及機(jī)制。
　　使用MTT法測(cè)定巨噬細(xì)胞的增殖指數(shù);中性紅法測(cè)定巨噬細(xì)胞的吞噬活性;試劑盒測(cè)定巨噬細(xì)胞分泌NO的量;掃描電鏡、AO染色和糖原染色觀察巨噬細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、

2、核酸和糖原代謝情況;RT-PCR檢測(cè)炎性因子TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-12的基因表達(dá)以及iNOS和COX-2的基因表達(dá);Westernblot測(cè)定TLR4、NF-κB和MAPK通路蛋白的表達(dá)。
　　MTT結(jié)果表明，60和80μg/mL的surfactin作用巨噬細(xì)胞24h，增殖指數(shù)達(dá)到108.5％和113.0％;5μg/mL的脂多糖(LPS)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞24h，增殖指數(shù)達(dá)到137.0％，surfactin和LPS共同

3、作用巨噬細(xì)胞，與LPS組相比，80μg/mLsurfactin使細(xì)胞增殖指數(shù)達(dá)到150.8％，surfactin與LPS在所使用劑量范圍內(nèi)對(duì)巨噬細(xì)胞無(wú)毒性。Surfactin能夠顯著抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的吞噬活性和NO的分泌量，最佳抑制濃度為60μg/mL，該濃度對(duì)吞噬活性的抑制率為47.6％(p＜0.01)，使NO分泌量由59.6μmol/L降至18.7μmol/L(p＜0.01)。Surfactin能夠顯著抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的

4、形態(tài)學(xué)變化，并降低LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞核酸和糖原的代謝水平。Surfactin能夠顯著抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞TLR4蛋白的表達(dá)，60μg/mL的surfactin使TLR4蛋白水平下降38.4％(p＜0.01)。Surfactin對(duì)LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎性因子和相關(guān)合酶的表達(dá)水平有顯著抑制作用，60μg/mLsurfactin對(duì)TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-12以及iNOS和COX-2mRNA表達(dá)水平的抑制率分別為83.3％、80

5、.4％、55.4％、55.8％、63.9％和66.3％(p＜0.01)。Westernblot結(jié)果顯示，surfactin能夠顯著抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞IκB-α的降解和NF-κBp65轉(zhuǎn)位入核;surfactin能夠顯著抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞MAPK家族ERK1/2、p38和JNK的磷酸化。
　　Surfactin能夠顯著抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的吞噬活性、分泌NO和TLR4蛋白的表達(dá)，能夠顯著抑制炎性因子的分泌及iNOS和COX