CD38缺失對(duì)LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎性因子表達(dá)和分泌的影響及其分子機(jī)制.pdf

1、目的：動(dòng)脈粥樣硬化是許多心血管疾病的重要成因。大量的實(shí)驗(yàn)證據(jù)和臨床資料表明，炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用，其機(jī)制與巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)并分泌大量炎性因子，促使泡沫細(xì)胞生成等密切相關(guān)。CD38是具有ADPR(ADP-ribosyl)環(huán)化酶和水解酶活性的雙功能酶，它可分別催化NAD+生成cADPR和催化cADPR降解成ADPR，其酶活性位點(diǎn)均定位于胞外結(jié)構(gòu)域。我們的前期實(shí)驗(yàn)顯示，CD38基因缺失可使高脂飲食誘導(dǎo)的Apo

2、E基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化損傷明顯加重。本文旨在探討CD38對(duì)巨噬細(xì)胞活化的影響及其可能的分子機(jī)制，從而為進(jìn)一步闡明CD38在動(dòng)脈粥樣硬化形成中的作用及其機(jī)制提供線索和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：⑴巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)和培養(yǎng):給野生型和CD38基因敲除小鼠腹腔注射0.5ml3％巰基乙醇酸鈉誘導(dǎo)其巨噬細(xì)胞分泌，三天后收集小鼠腹腔的巨噬細(xì)胞并進(jìn)行體外培養(yǎng)，經(jīng)鑒定后用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。⑵巨噬細(xì)胞基因表達(dá)及炎性因子分泌:取原代培養(yǎng)的腹腔巨噬細(xì)胞并用LPS(

3、1μg/ml)對(duì)其進(jìn)行刺激，實(shí)驗(yàn)分為4組每組3個(gè)樣本：野生型(W.T.)未刺激組；野生型(W.T.) LPS刺激組；CD38-/-未刺激組；CD38-/-LPS刺激組。利用RT-PCR或?qū)崟r(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)TLR4和相關(guān)炎性因子如TNF-α，IL-1β及巨噬細(xì)胞炎癥趨化因子MCP-1的mRNA表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)用Western Blot技術(shù)對(duì)NF-κ3蛋白表達(dá)量進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：①鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，與文獻(xiàn)描述相符，確認(rèn)為

4、巨噬細(xì)胞。②CD38缺失使LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎性因子分泌及相關(guān)蛋白表達(dá)升高。LPS刺激后W.T.組與CD38-/-組均出現(xiàn)TLR4表達(dá)量升高，炎性因子TNF-α，IL-1β及炎癥趨化因子MCP-1分泌增加；與LPS刺激W.T.組比較，CD38-/-組中TLR4及NF-κB表達(dá)量顯著升高；LPS刺激后CD38-/-組炎性因子TNF-α，IL-1β及炎癥趨化因子MCP-1分泌量較W.T.組增加。
　　結(jié)論：LPS可明顯誘導(dǎo)CD38-/