瑞舒伐他汀對ox-LDL誘導(dǎo)的人單核巨噬細(xì)胞組織因子表達(dá)的影響及其機(jī)制.pdf

1、研究背景和目的：冠狀動脈內(nèi)粥樣硬化斑塊由于血壓升高血流沖擊或者動脈內(nèi)膜痙攣等原因由穩(wěn)定狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)椴环€(wěn)定狀態(tài)，而后發(fā)生斑塊內(nèi)出血、破裂、血栓形成，是急性冠脈綜合征發(fā)生急性冠脈事件最主要的發(fā)病機(jī)理[1]。目前關(guān)于冠狀動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)血栓形成的形成機(jī)理已逐漸發(fā)展，已從過去普遍贊成的脂質(zhì)沉積假說逐漸發(fā)展演變成包括內(nèi)皮功能障礙、炎癥發(fā)應(yīng)、細(xì)胞凋亡、組織因子等多種病理因素共同參與的病因理論[2]。動脈粥樣硬化斑塊轉(zhuǎn)變?yōu)椴环€(wěn)定斑塊發(fā)生斑塊內(nèi)出血、壞

2、死、破漬后，潰瘍粗糙的表面易形成血栓，形成的血栓又使血管管腔的狹窄進(jìn)一步加重甚至使管腔發(fā)生閉塞。巨噬細(xì)胞的浸潤、血小板活性增強(qiáng)、凝血和纖溶系統(tǒng)失衡、炎癥反應(yīng)T細(xì)胞的堆積等都是觸發(fā)斑塊發(fā)生出血、破裂和血栓形成的病理性因素。正常生理狀態(tài)下，與血液接觸的細(xì)胞并不表達(dá)分泌組織因子(TF)，一但處在高血壓、炎癥、高血脂等病理因素的刺激下，血管內(nèi)皮細(xì)胞和單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的TF表達(dá)分泌加強(qiáng)[3]，增加動脈內(nèi)壁血栓的形成的幾率及提高動脈粥樣硬化斑塊轉(zhuǎn)

3、變成不穩(wěn)定狀態(tài)危險。過去的科研認(rèn)為引起冠脈梗塞的主要原因是冠狀動脈斑塊中血管內(nèi)皮平滑肌細(xì)胞的持續(xù)增殖引起的管腔進(jìn)行性狹窄，但目前的證據(jù)表明是冠脈斑塊的激活而不是狹窄參與了缺血和梗塞的發(fā)生…，大多數(shù)有急性冠脈綜合征的患者是由于斑塊激活為不穩(wěn)定斑塊，在表面形成血栓從而導(dǎo)致冠脈的狹窄或者閉塞。TF在單核及血管內(nèi)皮細(xì)胞病理情況下才表達(dá)，能啟動外源性凝血途徑。粥樣斑塊破裂導(dǎo)致動脈粥樣硬化組織(AS)中的巨噬細(xì)胞表達(dá)分泌的TF直接暴露于血液，激活外

4、源性凝血途徑啟動凝血瀑布反應(yīng)導(dǎo)致血管內(nèi)血栓的形成。肝細(xì)胞合成膽固醇的過程中的限速酶是羥甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶，其能催化HMG-CoA合成甲基二羥戊酸(MVA)，而內(nèi)源性的膽固醇合成中極其關(guān)鍵步驟是MVA的合成，因此，顯著減少內(nèi)源性的膽固醇合成的一個途徑便是抑制HMG-CoA還原酶的活性。作為羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶抑制劑的瑞舒伐他汀(Rosuvastatin)，可明顯下調(diào)低密度脂蛋白、甘油三酯、升高高密度脂蛋白

5、，其能否通過LOX-1介導(dǎo)的ox-LDL途徑，減少TF的表達(dá)，從而減少急性冠脈事件的發(fā)生率，該方面的研究報道極少。本實(shí)驗(yàn)以健康人外周靜脈血單核-巨噬細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對象，研究瑞舒伐他汀對ox-LDL誘導(dǎo)后的單核一巨噬細(xì)胞TF表達(dá)的影響并探討其可能的機(jī)制。
　　 目的：探討瑞舒伐他汀對ox-LDL誘導(dǎo)的人單核一巨噬細(xì)胞組織因子(TF)表達(dá)的影響及其可能機(jī)制。
　　 研究方法：采用體外密度離心法分離健康人單核細(xì)胞培養(yǎng)并傳至4代后，

6、以佛波脂(160nmol/ml)誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞，培養(yǎng)24h后用于實(shí)驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求分為空白對照組、ox-LDL組、LOX-I受體阻斷劑多聚肌苷酸組(PolyⅠ)、瑞舒伐他汀組。RT-PCR測各組LOX-1mRNA，TFmRNA的表達(dá)情況，ELISA檢測各組TF蛋白的表達(dá)。
　　 研究結(jié)果：用10×40倍倒置顯微鏡觀察，分離的人單核細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)及佛波酯誘導(dǎo)后，細(xì)胞轉(zhuǎn)化為梭形，容易聚集貼壁，經(jīng)流式細(xì)胞儀技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞鑒定，結(jié)果示大部分單

7、核細(xì)胞已經(jīng)轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞，符合實(shí)驗(yàn)要求。
　　 瑞舒伐他汀對ox-LDL誘導(dǎo)后人單核一巨噬細(xì)胞LOX-1mRNA和TFmRNA表達(dá)影響
　　 ①對TFmRNA的影響：四組之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=59.663P＜0.01)；Ox-LDL組與空白對照組比較，TFmRNA的表達(dá)顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；多聚肌苷酸組與ox-LDL組比較，TFmRNA的表達(dá)下降(P<0.01)，多于空白對照組(P<0.0

8、1)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；瑞舒伐他汀組與ox-LDL組比較，TFmRNA的表達(dá)下降(P<0.01)，多于空白對照組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 ②對LOX-ImRNA的影響：四組之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=170.513P

9、，多于空白對照組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；瑞舒伐他汀組與ox-LDL組比較，LOX-1mRNA的表達(dá)下降(P=0.010)，多于空白對照組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 瑞舒伐他汀對ox-LDL誘導(dǎo)后人單核-巨噬細(xì)胞TF蛋白表達(dá)的影響四組之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=259.098P<0.01)；Ox-LDL組與空白對照組比較，TF的表達(dá)顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；多聚肌苷酸組與ox-LD

10、L組比較，TF的表達(dá)下降(P=0.027)，多于空白對照組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；瑞舒伐他汀組與ox-LDL組比較，TF的表達(dá)下降(P=0.008)，多于空白對照組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 LOX-1mRNA和TFmRNA及TF表達(dá)之間的相關(guān)性分析采用Pearson檢驗(yàn)得LOX-1mRNA與TFmRNA之間相關(guān)系數(shù)r=0.882P<0.01；LOX-ImRNA與TF之間相關(guān)系數(shù)r=0.934p<0.

11、01；TFmRNA與TF之間相關(guān)系數(shù)r=0.863p<0.01。LOX-ImRNA、TFmRNA、TF間為正相關(guān)性。
　　 研究結(jié)論：
　　 (1)ox-LDL可誘導(dǎo)人單核．巨噬細(xì)胞LOX-1mRNA、TFmRNA、TF蛋白的表達(dá)增加。
　　 (2)LOX-1可能介導(dǎo)了ox-LDL誘導(dǎo)的人單核，巨噬細(xì)胞TF表達(dá)的增加，激活外源性凝血途徑，導(dǎo)致急性冠脈綜合癥(ACS)的發(fā)生。
　　 (3)瑞舒伐他汀可通過下