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文檔簡介
1、目的:用脂多糖(Lipopolysacctlaride,LPS)刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞,在體外模擬內(nèi)皮細胞的炎癥狀態(tài),觀察阿托伐他汀、LXR激動劑T0901317及兩者合用對LPS刺激的人臍靜脈內(nèi)皮細胞中膽固醇調(diào)節(jié)受體LXRα及其靶基因ABCA1、SREBP-1c、炎癥因子IL-6、粘附因子PECAM-1、ICAM-1的mRNA表達的影響,并探討其相關機制。
方法:將人臍靜脈內(nèi)皮細胞用含有10%胎牛血清、1%雙抗(鏈霉素/青
2、霉素)的Gibco1640培養(yǎng)基進行培養(yǎng),并按細胞計數(shù)后培養(yǎng)至6孔板中,進行以下干預實驗。①對照組(加入2μl的PBS溶液)與脂多糖干預組(用終濃度為100ng/ml的LPS干預細胞24小時);②阿托伐他汀干預組(用不同濃度的阿托伐他汀0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L及DMSO)干預細胞2小時,然后加入脂多糖共同干預22小時;③LXR激動劑T0901317干預組(先用T09013171μmol/L或DMSO干預細胞2
3、小時,然后加入脂多糖共同干預22小時);④阿托伐他汀+T0901317組(先用DMSO、阿托伐他汀、T0901317以及阿托伐他汀和T0901317共同干預2小時,然后加入脂多糖100ng/ml共同干預22小時)。以上所有實驗后收獲細胞,用Trizol提取細胞總RNA,然后進行逆轉(zhuǎn)錄,并行real-time PCR進行半定量測定。比較各組中LXRα及其靶基因、炎癥因子及粘附因子的表達變化。
結(jié)果:與對照組相比,LPS可以抑
4、制人臍靜脈內(nèi)皮細胞中LXRα及其靶基因ABCA1、SREBP-1 mRNA的表達,促進炎癥因子IL-6及粘附因子ICAM-1、PECAM-1 mRNA的表達;阿托伐他汀可以呈濃度依賴性地上調(diào)細胞中LXRα及其相應靶基因的表達,抑制相應炎癥因子及粘附因子表達,而T0901317可以明顯上調(diào)細胞中LXRα、ABCA1及SREBP-1的表達,抑制IL-6、ICAM-1及PECAM-1的表達;T0901317和阿托伐他汀合用可明顯增強以上基因的
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