辛伐他汀對Tribbles在脂多糖刺激的人臍靜脈內皮細胞中表達的影響.pdf

1、目的： 1999年ROSS提出動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥疾病，它的形成是血管內皮細胞、單核細胞、血管平滑肌細胞與炎癥介質相互作用的結果，以粥樣斑塊中出現(xiàn)單核細胞、巨噬細胞和T淋巴細胞為特征。血管內皮細胞在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用。血管內皮細胞直接接觸血液，血液中的異常物質可直接影響內皮細胞，如ox-LDL等。血管內皮細胞受到刺激后，可分泌多種細胞因子，促進白細胞粘附、血管平滑肌細胞增殖及遷移等。 Tri

2、bbles是在果蠅體內發(fā)現(xiàn)一種抑制有絲分裂的蛋白激酶，也稱為神經(jīng)細胞死亡誘導蛋白激酶（SINK）。在哺乳動物體內有三種TRBs基因家族成員：TrbI，Trb2，Trb3。Tribbles蛋白擁有一個相同的中心區(qū)，以及70-100個氨基酸殘基的氮末端和25個殘基的碳末端區(qū)。此中心區(qū)是一個類似絲氨酸--蘇氨酸蛋白激酶，但缺乏賴氨酸活性位點的區(qū)域，因而具有激酶活性調控作用，可調節(jié)MAPK上游MAPKK的表達，從而調節(jié)MAPK的磷酸化，而MAP

3、K可與轉錄因子NF-κ B和AP-1等的表達有關。 脂多糖為經(jīng)典的炎癥刺激物，是實驗中最常用的炎癥刺激因子。脂多糖可激活內皮細胞，促使NO、氧自由基、趨化因子、細胞因子、前列腺素等的表達，這些炎癥因子通過自分泌或旁分泌等途徑促使細胞損傷，內皮細胞間隙增大，血管基膜暴露，中性粒細胞和單核細胞等遷移內皮下，致使損傷加劇。脂多糖可通過TLR-4激活血管內皮細胞中MAPKs及NF-κ B等信號傳導途徑。 他汀類（statins）

4、藥物屬于3-羥-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶（HMG-CoA）抑制劑，可以降低血清膽固醇的含量，是治療動脈粥樣硬化的常用藥。越來越多的研究表明，他汀類藥物不僅具有降脂作用，還具有抗炎作用，其抗炎作用主要通過抑制NF-κ B途徑實現(xiàn)。 本實驗應用脂多糖作為炎癥刺激物，辛伐他汀作為保護藥物，觀察Tribbles在脂多糖激活的人臍靜脈內皮細胞中的mRNA表達變化以及辛伐他汀對其表達的影響。 方法： 1.細胞培養(yǎng)：取新鮮臍

5、帶，分離人臍靜脈內皮細胞，培養(yǎng)，鑒定，傳代，第2-3代的細胞用來實驗。 2.細胞分組：將細胞隨機分成12h、24h兩組，每組又分為：①對照組；②脂多糖組（100ng/mL）：③辛伐他汀組（5μg/mL）；④脂多糖與辛伐他汀共作用組。吸去細胞上清液后將細胞凍存在-80℃留做熒光實時定量PCR檢測。 3.收集細胞，分別抽取mRNA，反轉錄cDNA，進行熒光實時定量PCR檢測IL-6、TNF-α、Trb1、Trb2及Trb3的

6、mRNA表達，記錄結果。 4.上述實驗重復6次，并用統(tǒng)計學分析軟件進行統(tǒng)計分析。 結果： 1.人臍靜脈內皮細胞鑒定結果：形態(tài)學鑒定，相差顯微鏡下，內皮細胞分布均勻，單層生長，形態(tài)為多角形，鵝卵石狀鑲嵌排列；內皮細胞Ⅷ因子相關抗原SABC法檢測鑒定，相差顯微鏡下，內皮細胞胞漿中可見棕黃色顆粒，鑒定結果為人臍靜脈內皮細胞。 2.實時定量PCR結果：與對照組相比，脂多糖組IL-6、TNF-α、Trb1及Trb3

7、的mRNA表達明顯增強（P>0.05）；與脂多糖組相比，脂多糖與辛伐他汀共作用組IL-6、TNF-α、Trb1及Trb3的mRNA表達明顯減少（P<0.05）。 結論： 1.脂多糖可以誘導人臍靜脈內皮細胞IL-6、TNF-α、Trb1及Trb3的mRNA表達增加。 2.辛伐他汀可以抑制由脂多糖誘導的人臍靜脈內皮細胞IL-6、TNF-α、Trb1及Trb3的mRNA表達。 3.Trb1及Trb3可促進脂多糖