香煙提取物對人臍靜脈血管內皮細胞的損傷及阿托伐他汀的干預.pdf

1、背景：周圍血管缺血性疾病如動脈硬化閉塞(AS)、血栓閉塞性脈管炎(TAO)是血管外科比較常見的疾病，其病因不清、治療棘手、療效不理想，尤其是血栓閉塞性脈管炎。吸煙是此類疾病發(fā)生發(fā)展的重要危險因素，而此類疾病的始動因素則往往是血管內皮細胞的損傷，因此，探究吸煙對血管內皮細胞的損傷有利于我們了解此類疾病發(fā)生機制。本文采用體外細胞培養(yǎng)的方法來探究香煙提取物對血管內皮細胞的損傷，并同時探究阿托伐他汀對該損傷的干預作用，以期為臨床該類疾病的預防和

2、治療提供新的思路和途徑。
　　目的：探討香煙提取物(CSE)對人臍靜脈血管內皮細胞(HUVEC)的生長、形態(tài)、一氧化氮(NO)的生成、一氧化氮合成酶(NOS)的活性和細胞間粘附分子-1(ICAM-1)蛋白表達的影響作用，以及探討阿托伐他汀對該作用的干預。
　　方法：采用體外培養(yǎng)的人臍靜脈血管內皮細胞為實驗對象，將細胞分為：①正常對照組：用含體積分數(shù)10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)；②香煙提取物組：在體積分數(shù)10％胎牛血清的

3、DMEM培養(yǎng)基中加入香煙提取物使其終濃度為10％；③香煙提取物邯可托伐他汀組：在體積分數(shù)10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中加入阿托伐他汀使其終濃度為10μmol/L，作用細胞4h后，再加入香煙提取物使其終濃度為10％。采用倒置顯微鏡觀察各組細胞形態(tài)的變化，MTT法檢測細胞的抑制率，硝酸還原酶法檢測細胞上清液中的一氧化氮值，免疫細胞化學法檢測細胞一氧化氮合成酶活性，Western blotting檢測ICAM-1蛋白表達情況。
　　結

4、果：在倒置光學顯微鏡100倍下可觀察到受香煙提取物刺激后的細胞較正常對照組細胞形態(tài)變不規(guī)則，細胞排列稀疏、紊亂，部分細胞碎裂、胞漿胞核分離、并且有部分細胞凋亡，存活率降低；而加入了阿托伐他汀的細胞形態(tài)稍不規(guī)則，有個別細胞出現(xiàn)胞漿胞核分離，但較香煙提取物組有明顯改善。同時，用硝酸還原酶法檢測到香煙提取物組細胞一氧化氮生成量較對照組明顯減少(p<0.05)，而阿托伐他汀組細胞一氧化氮生成量與對照組相比并無明顯差別(p>0.05)。免疫細胞化

5、學結果顯示受香煙提取物刺激后的內皮細胞胞漿內一氧化氮合成酶棕褐色染色強度明顯減弱，陽性細胞的百分率降低(P<0.05)，而阿托伐他汀組細胞染色強度及陽性細胞的百分率較對照組并無明顯差別(p>0.05)。Western blotting檢測ICAM-1蛋白表達情況表明：香煙提取物組細胞ICAM-1蛋白表達較對照組明顯增加(p<0.05)，阿托伐他汀組細胞較正常對照組無明顯差異(p>0.05)。
　　結論：通過本實驗研究表明，香煙提取

6、物作用于培養(yǎng)的人臍靜脈血管內皮細胞，細胞形態(tài)改變、生長受抑制、一氧化氮生成減少，一氧化氮合成酶活性降低，ICAM-1蛋白表達增加；阿托伐他汀可在一定程度上拮抗香煙提取物引起的細胞形態(tài)改變、生長受抑制、一氧化氮生成減少，一氧化氮合成酶活性降低，ICAM-1蛋白表達增加。故香煙提取物可能通過上述機制引起血管內皮細胞的損傷進而導致周圍血管缺血性疾病的發(fā)生發(fā)展，而阿托伐他汀則能通過上述機制拮抗香煙提取物對血管內皮細胞的損傷作用，可能對周圍血管缺