阿托伐他汀對衰老的血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬作用的影響及研究.pdf

1、第一部分、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞衰老模型的建立及鑒定
　　 目的:為研究阿托伐他汀對衰老的血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬作用的影響，我們通過AngⅡ干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)，建立血管內(nèi)皮細(xì)胞衰老的的模型。
　　 方法:無菌培養(yǎng)HUVECs，選擇生長狀況良好的細(xì)胞用于實驗。實驗分為:(1)對照組:不加干預(yù)因素;(2)加入1×10-5mol/L的AngⅡ;(3)加入1×10-6mol/L的AngⅡ;(4)加入1×10-7mol/L的

2、AngⅡ。干預(yù)48小時后收集細(xì)胞，衰老β—半乳糖苷酶染色及細(xì)胞周期鑒定細(xì)胞衰老情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期顯示:與對照組相比，隨著AngⅡ濃度的升高，G0/G1期細(xì)胞百分率逐漸增多，S期細(xì)胞百分率逐漸減少，G2期無明顯差異。與對照組相比，10-7mol/L AngⅡ組無明顯差異，10-6和10-5 mmol/L AngⅡ組有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 2.衰老相關(guān)β-gal染色結(jié)

3、果顯示:與對照組相比，隨著AngⅡ濃度的升高，衰老細(xì)胞β-gal染色陽性率明顯升高，有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，提示加入AngⅡ可增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞β-gal的活性。
　　 結(jié)論:AngⅡ可誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)衰老。
　　 第二部分、阿托伐他汀對血管內(nèi)皮細(xì)胞衰老和自噬的影響
　　 目的:探討阿托伐他汀對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞衰老和自噬的影響及可能的信號通路。
　　 方法:實驗分組:1）對照組:不加干

4、預(yù)因素;(2) AngⅡ組:只加入1×10-6mol/L的AngⅡ;(3) AngⅡ+阿托伐他汀組:加入1×10-6mol/L的阿托伐他汀1h后加入1×10-6mol/L AngⅡ;(4) AngⅡ+阿托伐他汀+Rapa組:加入1×10-6mol/L的阿托伐他汀及10-7 mol/L的雷帕霉素1h后再加入1×10-6mol/L AngⅡ。每組設(shè)3個復(fù)空(n=3)，實驗重復(fù)3次。干預(yù)48小時后收集細(xì)胞。衰老β-半乳糖苷酶染色及細(xì)胞周期鑒定

5、細(xì)胞衰老情況，Western Blot技術(shù)檢測自噬相關(guān)蛋白LC3和Beclin1的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.流式細(xì)胞術(shù)示細(xì)胞周期:與AngⅡ組相比，AngⅡ+阿托伐他汀組表現(xiàn)為G1期減少和S期的增加;AngⅡ+阿托伐他汀+Rapa組與AngⅡ+阿托伐他汀組相比，處于G0/G1細(xì)胞增加，處于S期的細(xì)胞減少。
　　 2.衰老相關(guān)β-gal染色結(jié)果:與AngⅡ組相比，阿托伐他汀組表現(xiàn)為β-半乳糖苷酶染色陽性率明顯

6、減低（6.48±3.52）P＜0.05; AngⅡ+阿托伐他汀+Rapa組與AngⅡ+阿托伐他汀組相比，β-半乳糖苷酶染色陽性細(xì)胞明顯增多（13.27±2.67），P＜0.05。
　　 3.Western blot檢測線粒體自噬相關(guān)蛋白表達(dá):與AngⅡ組相比，AngⅡ+阿托伐他汀組LC3-Ⅱ/Ⅰ比值下降，Beclin1表達(dá)明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05);與AngⅡ+阿托伐他汀組相比，Rapa組LC3-Ⅱ/Ⅰ比值上調(diào)，Be