阿托伐他汀對(duì)高糖環(huán)境下內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：本研究旨在探討阿托伐他汀(Atorvastatin)對(duì)高糖誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)中TLR4/NF-κB信號(hào)通路激活所介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的作用。
　　方法：1)qRT-PCR法檢測(cè)不同濃度梯度葡萄糖(5.5、10、20、30、40mM D-GS)刺激HUVECs不同時(shí)間(6h、12h、24h、48h)后TLR4和NF-κB mRNA的表達(dá)水平，篩選出最適合的葡萄糖濃度和作用時(shí)間;2）qRT-PCR法和Western

2、blot法檢測(cè)高糖(30mM D-GS)刺激HUVECs12h后TLR4、MyD88和NF-κB的表達(dá)水平，qRT-PCR法和EHSA法檢測(cè)炎癥因子IL-6、IL-8和TNFα的表達(dá)，NO硝酸還原酶法檢測(cè)細(xì)胞上清中NO含量;3）MTT毒性試驗(yàn)檢測(cè)高糖(30mM D-GS)刺激HUVECs12h后，再加入不同梯度濃度阿托伐他汀(0、1、2.5、5、10、20、40、80uM)處理24h后檢測(cè)細(xì)胞抑制率，通過(guò)計(jì)算IC50及細(xì)胞形態(tài)圖篩選出最

3、適藥物濃度的范圍;然后，通過(guò)qRT-PCR法檢測(cè)最適藥物濃度各組TLR4和NF-κB的表達(dá)水平，篩選出最佳的藥物濃度;4）將實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分為對(duì)照組(5.5mM D-GS)、AT組(5.5mM D-GS+5μM Atorvastatin)、高糖組(30mM D-GS)和高糖聯(lián)合阿托伐他汀組(30mM D-GS+5μM Atorvastatin)，通過(guò)qRT-PCR法和Western blot法檢測(cè)各組細(xì)胞的TLR4、MyD88和NF-κB的表

4、達(dá)水平，免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞NF-κB的表達(dá)情況，qRT-PCR法和ELISA法檢測(cè)處理后各組細(xì)胞炎癥因子IL-6、IL-8、TNFα的表達(dá)，以及NO硝酸還原酶法檢測(cè)處理后各組細(xì)胞上清的NO含量。
　　結(jié)果：1）與對(duì)照組(5.5mM D-GS)相比，高糖組(30mM D-GS)刺激HUVECs12h后TLR4和NF-κB mRNA表達(dá)水平升高最為明顯(P＜0.05);2)與對(duì)照組相比，高糖組TLR4/NF-κB信號(hào)通路相關(guān)分子

5、（TLR4、MyD88和NF-κB）及炎癥相關(guān)因子（IL-6、IL-8、TNFα、NO）的表達(dá)水平表達(dá)均顯著升高(P＜0.05);3)MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示阿托伐他汀的IC50為10.3μM，阿托伐他汀加入濃度小于10.3μM時(shí)對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響最小;與高糖組相比，隨著加入阿托伐他汀(0、1、2.5、5μM Atorvastatin)濃度的升高，TLR4和NF-κB的表達(dá)水平受到一定抑制，其中以5μM Atorvastatin組最為明顯(

6、P＜0.01);4)相比較于對(duì)照組，高糖組TLR4/NF-κB信號(hào)通路相關(guān)分子(TLR4、NF-κB)及炎癥相關(guān)因子(IL-6、IL-8、TNFα、NO)的mRNA和蛋白水平表達(dá)均顯著升高(P＜0.05)，而高糖聯(lián)合阿托伐他汀組相比較于高糖組，TLR4/NF-κB信號(hào)通路相關(guān)分子（TLR4、MyD88和NF-κB）及炎癥相關(guān)因子(IL-6、IL-8、TNFα、NO)的表達(dá)均受到明顯抑制(P＜0.05)。
　　結(jié)論：本研究結(jié)果證實(shí)高