RXRα在阿托伐他汀抑制高糖誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞氧化應(yīng)激損傷中的作用和機制.pdf

1、第一部分：
　　目的:視黃醛X受體(retinoid X receptor,RXR)激動劑具有抗動脈粥樣硬化作用,但機制尚不清楚。本研究探討RXRa在高濃度葡萄糖環(huán)境誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的氧化應(yīng)激反應(yīng)過程中的作用和機制。
　　方法:體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),以25mmol/L葡萄糖干預(yù),模擬糖尿病患者體內(nèi)環(huán)境建立高糖損傷模型

2、。通過流式細胞學(xué)方法和熒光顯微鏡檢測細胞內(nèi)的活性氧離子(ROS)的水平,評價RXR受體激動劑9-cis-RA(9-cis-retinoid acid)和RXR抑制劑UVI3003對高糖環(huán)境血管內(nèi)皮細胞氧化應(yīng)激損傷的作用;逆轉(zhuǎn)錄和實時定量PCR技術(shù)檢測煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate oxidase,NADPH oxidase)的Nox4、Nox2和p2

3、2phox亞基的表達;采用Lucigenin化學(xué)發(fā)光法測定NADPH氧化酶的活性;用免疫印跡雜交方法檢測高糖環(huán)境下9-cis-RA和UVI3003對蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的表達和活化水平的影響;通過轉(zhuǎn)染小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)使RXRa表達減少以及轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA使RXRa過表達,研究RXRa對高糖誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激及PKC活化的影響。
　　結(jié)果:(1)9-c

4、is-RA能弱化高糖誘導(dǎo)下內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的氧化應(yīng)激反應(yīng),UVI3003能增強氧化應(yīng)激損傷;(2)9-cis-RA抑制高糖誘導(dǎo)的HUVEC中Nox4、Nox2和p22phox亞基的mRNA表達,也弱化高糖刺激下NADPH氧化酶的活性,UVI3003則產(chǎn)生相反的作用;(3)9-cis-RA能夠抑制高糖環(huán)境下PKC的活化,UVI3003能增加PKC的活化水平;(4)通過使用轉(zhuǎn)染RXRα特異性siRNA,減少RXRα基因表達能弱化高糖環(huán)境下9-c

5、is-RA抗氧化應(yīng)激和抑制PKC活化的作用。轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA上調(diào)RXRα表達,能強化9-cis-RA的抗氧化應(yīng)激作用以及對PKC磷酸化的抑制作用。
　　結(jié)論:RXRα可能參與并抑制了高糖誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的氧化應(yīng)激反應(yīng)。
　　第二部分：
　　目的:阿托伐他汀在其降脂作用以外,還表現(xiàn)出了抗氧化應(yīng)激、抗炎癥等心血管保護作用,但其具體機制尚不清楚。他汀能通過結(jié)合核受體發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)。本研究探討RXRa在阿托伐他汀抑制高糖誘導(dǎo)

6、的氧化應(yīng)激反應(yīng)過程中的作用和機制。
　　方法:體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(HUVECs),以25mmol/L葡萄糖干預(yù),模擬糖尿病患者體內(nèi)環(huán)境建立高糖損傷模型。通過流式細胞學(xué)方法和熒光顯微鏡檢測細胞內(nèi)的活性氧離子(reactive oxygen species,ROS)的水平,評價阿托伐他汀對高糖環(huán)境血管內(nèi)皮細胞氧化應(yīng)激損傷的保護作用;逆轉(zhuǎn)錄和實時定量PCR結(jié)合免疫雜交技術(shù)檢測煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nicotinami

7、de-adenine dinucleotide phosphate oxidase,NADP Hoxidase)的Nox4、p22phox和Nox2/gp91phox亞基的表達,探討高糖環(huán)境阿托伐他汀對于NADPH氧化酶亞基表達的影響;采用Lucigenin化學(xué)發(fā)光法測定NADPH氧化酶的活性,利用GSTpull-down技術(shù)檢測Rac-1蛋白的激活;用免疫印跡雜交方法檢測蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的表達和活

8、化水平;通過轉(zhuǎn)染小干擾RNA(siRNA)使RXRa表達減少以及轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA使RXRa過表達,研究RXRa在高糖環(huán)境下阿托伐他汀抗氧化應(yīng)激以及對PKC活化抑制作用的影響。
　　結(jié)果:(1)高糖干預(yù)后,HUVEC內(nèi)ROS的含量明顯增加(8.14±0.37vs1.24±0.22,P<0.05),阿托伐他汀能明顯的抑制高糖環(huán)境下HUVEC內(nèi)ROS的生成;(2)高糖能顯著誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞中NADPH氧化酶的活性,阿托伐他汀能弱化高糖刺激下N

9、ADPH氧化酶的活性(821±74vs1324±49,P<0.05);(3)高糖處理顯著上調(diào)了NADPH氧化酶Nox4、p22phox和Nox2亞基的mRNA以及蛋白表達水平,阿托伐他汀抑制高糖誘導(dǎo)的HUVEC中Nox4、p22phox和Nox2亞基的表達;(4)阿托伐他汀能夠抑制高糖環(huán)境下NADPH氧化酶上游激活物Rac-1的活化;(5)阿托伐他汀能夠抑制高糖環(huán)境下PKC的表達和活化;(6)通過使用轉(zhuǎn)染RXRα特異性siRNA,減少R