硫辛酸抑制高糖誘導的人主動脈內皮細胞氧化應激和細胞凋亡.pdf

1、目的：
　　作為一種由多種原因引起的以慢性高血糖為特征的終身代謝性疾病，糖尿病已經成為21世紀人類所面臨的最具挑戰(zhàn)性的疾病之一。長期持續(xù)的血糖增高會導致大血管、微血管損害而導致心、腦、腎、周圍神經、眼睛、足等發(fā)生病變。據估計，糖尿病患者中75%的死亡率都是由于心血管疾病所引起的。越來越多的研究表明炎癥和氧化應激在糖尿病血管系統(tǒng)并發(fā)癥的形成和發(fā)展的起著重要作用。α-硫辛酸（LA），是一種線粒體中的輔酶，因有很強的還原性，被稱為“萬能

2、抗氧化劑”。本課題通過高濃度葡萄糖誘導人主動脈內皮細胞損傷，建立糖尿病細胞模型，用不同劑量的α-硫辛酸進行干預處理，探討α-硫辛酸對高糖誘導的人主動脈內皮細胞炎癥反應和氧化應激作用的影響并揭示其相關機制。
　　方法：
　　體外建立高糖（30mM）誘導的人主動脈細胞（HAECs）損傷模型，分別加入不同濃度硫辛酸（50，100，200μM）。用還原性谷胱甘肽（GSH）測試盒檢測細胞中GSH的含量。采用流式細胞技術檢測硫辛酸對高糖

3、誘導的HAECs內活性氧（ROS）產生量的影響。利用蛋白質印跡法（Western Blot）方法檢測HAECs中NADPH氧化酶-4(Nox4)、p22phox、Caspase-3、Bcl-2蛋白的表達水平，細胞色素C的線粒體釋放以及Nuclear Factor-κB(NF-κB)信號通路的激活情況。采用實時熒光測定PCR(Real-time RT-PCR)檢測Nox4、p22phox mRNA的表達水平。
　　結果：
　　

4、1.與空白組相比較，高糖誘導后HAECs中GSH含量明顯降低(p<0.01)，硫辛酸給予后可以劑量依賴性的增加人細胞中GSH的表達量(p<0.01)；2.與空白組相比較，高糖增加HAECs中ROS的過量產生(p<0.01)、增加Nox4和p22phox mRNA和蛋白的過量表達（p<0.01，p<0.01），加入不同濃度的硫辛酸后高糖誘導人主動脈內皮細胞中活性氧 ROS的產生量明顯減少（p<0.05），且硫辛酸抑制高糖誘導的Nox4和p

5、22phox mRNA和蛋白的過量表達（p<0.01,p<0.01）；3.與空白組相比較，高糖顯著增加I-κB的降解，促進P65的核轉位，從而增加NF-κB的轉錄活性，而硫辛酸可以抑制高糖誘導的細胞中 I-κB的降解，以及 P65的核轉位，進而抑制NF-κB信號通路的激活（p<0.05）；4.高糖誘導后，凋亡相關蛋白Caspcase-3表達上調而抗凋亡蛋白Bcl-2表達明顯下降（p<0.01），硫辛酸干預后使抗凋亡蛋白Bcl-2的表達呈

6、濃度依賴性增加（p<0.01），同時硫辛酸還能下調凋亡蛋白Caspcase-3的表達（p<0.01）；5.與空白組相比較，高糖使人主動脈內皮細胞中細胞色素 C的線粒體釋放量增加，而加入硫辛酸后減少高糖誘導的細胞色素 C的線粒體釋放（p<0.05）。
　　結論：
　　硫辛酸可以抑制高糖誘導的HAECs中ROS過量產生，抑制還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）家族中Nox4、p22phox亞基的mRNA和蛋白的過量表達；