α-硫辛酸對高糖培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞氧化應激以及分泌VEGF與PEDF的影響.pdf

1、目的:糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一種臨床常見的慢性疾病。隨著人們物質(zhì)生活水平的提高，以營養(yǎng)過剩、缺乏運動與超重肥胖為主要特征的不健康生活方式日益流行，DM的發(fā)病率和死亡率逐年上升。DM已成為繼心血管疾病和癌癥之后人類的第三大死亡原因。糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy，DR)是DM最常見的慢性微血管并發(fā)癥之一，每年造成的失明患者超過10，000人。DR的發(fā)病機制復雜，尚未完全闡明。近年來

2、許多研究認為，氧化應激反應是糖尿病慢性并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的共同通路。高糖狀態(tài)下機體氧化與抗氧化防御系統(tǒng)失衡，氧自由基清除能力下降，氧化應激產(chǎn)物堆積，損傷組織和細胞。視網(wǎng)膜組織含有豐富的多不飽和脂肪酸，對血液中氧分子的攝取量最高，對于氧化應激反應也更加敏感。DR的基本病理改變是血-視網(wǎng)膜屏障破壞，新生血管和纖維生成。新生血管的發(fā)生發(fā)展是臨床面臨的難題，后期可引起玻璃體積血和牽拉性視網(wǎng)膜脫離，嚴重影響視力甚至導致失明。血管內(nèi)皮生長因子(vasc

3、ular endothelial growth factor，VEGF)和色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor，PEDF)分別作為主要的血管刺激因子與血管抑制因子，其二者間的平衡調(diào)節(jié)對于新生血管形成是至關(guān)重要的。已有文獻指出，高糖可導致視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)細胞分泌的VEGF和PEDF表達量發(fā)生改變以及促進RPE細胞增生。隨著氧化應激

4、和細胞因子學說在DR發(fā)病機制中的探索，尋找安全有效的抗氧化藥物，恢復血管刺激因子與抑制因子之間的平衡狀態(tài)，對于提高患者的生活質(zhì)量有重要意義。硫辛酸(lipoic acid,LA)富含于多種食物中，是應用廣泛作用強大的抗氧化劑。本實驗應用不同濃度的α-硫辛酸(alpha lipoic acid，α-LA)作用于高糖體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮(human retinal pigment epithelial，HRPE)細胞48小時，觀察HRP

5、E細胞形態(tài)、活力、氧化應激水平以及VEGF、PEDF分泌含量的變化，以研究α-LA對高糖環(huán)境下HRPE細胞的保護作用并進一步探討該藥治療DR的可能作用機制。
　　 方法:體外培養(yǎng)HRPE細胞，隨機分為7組:(1)正常對照組(葡萄糖濃度:5.56mmol/L);(2)高糖組(葡萄糖濃度:30mmol/L);(3)高滲對照組(5.56mmol/L葡萄糖+24.44mmol/L甘露醇);(4)高糖+α-LA(50μmol/L)組;(5

6、)高糖+α-LA(100μmol/L)組;(6)高糖+α-LA(200μmol/L)組;(7)高糖+α-LA(300μmol/L)組。各組細胞在不同條件培養(yǎng)液中培養(yǎng)48h，取處于對數(shù)生長期細胞用于實驗。觀察HRPE細胞形態(tài)，用MTT法檢測不同濃度α-LA對細胞活力的影響，比色法檢測丙二醛(malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)和谷胱甘肽(glutathione，GSH

7、)的變化，用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測定HRPE細胞上清液中VEGF與PEDF的含量。
　　 結(jié)果:
　　 1、高糖組的細胞活性明顯低于正常對照組(P＜0.05）;甘露醇組細胞活性與正常對照組相比無明顯改變;各濃度的α-LA干預組細胞活性均較高糖組升高(P＜0.05），總體上呈劑量依賴性。
　　 2、與正常對照組相比，高糖組的MDA含量明顯升高，SOD活性、GSH含量明顯下降(P＜0.05);甘露醇

8、組則無明顯改變;α-LA干預后，相較高糖組，各給藥組SOD活性及GSH含量均升高，MDA含量降低(P＜0.05)，呈劑量依賴性;各藥物濃度組與正常對照組相比有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　 3、與正常對照組相比，高糖組VEGF分泌含量明顯增加，PEDF含量明顯減少(P＜0.05）;甘露醇組則無明顯變化;α-LA(50，100，200，300μmol/L)能增加PEDF的分泌含量，降低VEGF的分泌含量，相較高糖組有統(tǒng)計學差異

9、(P＜0.05），且呈濃度依賴性;各濃度α-LA干預組與正常對照組相比VEGF、PEDF的水平均有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1、高糖環(huán)境可導致HRPE細胞活力減低，氧化應激水平增強，以及分泌VEGF增多，分泌PEDF減少，這可能與DR的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。
　　 2、一定濃度的α-LA可抑制高糖環(huán)境下HRPE細胞的氧化應激水平，使VEGF分泌減少和PEDF分泌增多。提示α-LA可能通過抗氧化作用