胰島素對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞PEDF表達的影響.pdf

1、[目的]
　　觀察正常及高濃度葡萄糖(high glucose)條件下，胰島素(insulin)對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞增殖及其合成色素上皮細胞衍生因子(pigment epithelium-derived factor，PEDF)的影響，探討胰島素對糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy，DR)的影響。
　　[方法]
　　體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細胞(cultured human retinal p

2、igment epithelial cells-19，ARPE-19)，分別置于5.6mmol/L葡萄糖（正常濃度葡萄糖組）及30mmol/L葡萄糖（高濃度葡萄糖組）條件下，以不同濃度胰島素(1U/L，10U/L，100U/L，103U/L，104U/L)分別予以干預(yù)，干預(yù)12小時、24小時、48小時、72小時，以MTT法檢測細胞增殖情況;置于5.6mmol/L葡萄糖及30mmol/L葡萄糖條件下培養(yǎng)的ARPE-19細胞，以不同濃度胰島

3、素(103U/L，104U/L)分別予以干預(yù)，干預(yù)12小時、24小時、48小時，以蛋白免疫印跡法(western blot)檢測細胞胞漿中PEDF蛋白的表達量。
　　[結(jié)果]
　　MTT法顯示:在正常濃度葡萄糖組，各濃度胰島素對細胞增殖活力的影響差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);在高濃度葡萄糖組，各濃度胰島素對細胞增殖活力的影響差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　蛋白免疫印跡法檢測顯示:(1)正常濃度葡萄糖組，作用

4、12小時，胰島素濃度103U/L、104U/L干預(yù)組均顯示細胞胞漿中PEDF蛋白表達量較空白對照組增高(P＜0.05);作用24小時、48小時，胰島素濃度103U/L、104U/L干預(yù)組細胞胞漿中PEDF蛋白表達量較空白對照組減少(P＜0.05);各個觀察時點，胰島素濃度104U/L干預(yù)組的PEDF蛋白表達量均較胰島素濃度103U/L干預(yù)組增高(P＜0.05)。胰島素濃度103U/L及104U/L干預(yù)組細胞胞漿中PEDF蛋白的表達隨著作

5、用時間延長有降低的趨勢(P＜0.05)。
　　(2)高濃度葡萄糖組，作用12小時，胰島素濃度103U/L、104U/L干預(yù)組細胞胞漿中PEDF蛋白表達量較空白對照組降低(P＜0.05)，其中胰島素濃度104U/L組細胞胞漿中PEDF蛋白表達量較103U/L組低(P＜0.05);作用24小時，胰島素濃度103U/L干預(yù)組細胞胞漿中PEDF蛋白表達量較空白對照組高(P＜0.05);104U/L干預(yù)組細胞胞漿中PEDF蛋白表達量較空白對

6、照組略高，但差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，104U/L干預(yù)組細胞胞漿中PEDF蛋白表達量較103U/L干預(yù)組低(P＜0.05);作用48小時，胰島素濃度103U/L、104U/L干預(yù)組細胞胞漿中PEDF蛋白表達量較空白對照組增高(P＜0.05)，且胰島素濃度104U/L組細胞胞漿中PEDF蛋白表達量較103U/L組高(P＜0.05)。各胰島素濃度(103U/L、104U/L)干預(yù)組，細胞胞漿中PEDF蛋白相對表達量隨著作用時間延

7、長先減少后增加(P＜0.05)。
　　[結(jié)論]
　　正常濃度葡萄糖及高濃度葡萄糖條件下，胰島素不影響人視網(wǎng)膜色素上皮細胞的增殖;正常濃度葡萄糖條件下，短時間內(nèi)(12小時)高濃度胰島素能促進RPE細胞合成PEDF，隨著作用時間延長，細胞胞漿內(nèi)合成的PEDF蛋白量逐漸減少;高濃度葡萄糖條件下，短時間內(nèi)（12小時）高濃度胰島素能抑制RPE細胞合成PEDF蛋白，作用24小時后，高濃度胰島素對細胞內(nèi)PEDF蛋白合成呈促進趨勢。高濃度胰