枸杞多糖對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)對(duì)H2O2誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞株(ARPE-19細(xì)胞)損傷的保護(hù)作用,以及探討枸杞多糖對(duì)CoCl2誘導(dǎo)的ARPE-19細(xì)胞表達(dá)VEGF的影響。
　　方法:
　　采用CCk-8法檢測不同濃度H2O2誘導(dǎo)的ARPE-19細(xì)胞的存活率,構(gòu)建氧化損傷模型;采用CCk-8法檢測不同濃度LBP對(duì)ARPE-19細(xì)胞活力的影響;采用

2、CCk-8法和流式細(xì)胞儀雙染法檢測LBP對(duì)H2O2誘導(dǎo)的ARPE-19細(xì)胞的存活率和凋亡比例的影響;采用實(shí)時(shí)定量PCR法分別檢測LBP干預(yù)、H2O2損傷和正常情況下細(xì)胞Bax和Bcl-2表達(dá)水平的差異;采用ELISA法檢測不同濃度CoCl2的誘導(dǎo)對(duì)ARPE-19細(xì)胞分泌VEGF的影響;采用實(shí)時(shí)定量PCR法分別檢測LBP干預(yù)、CoCl2誘導(dǎo)和正常情況下細(xì)胞VEGF表達(dá)水平的差異。
　　結(jié)果:
　　CCk-8結(jié)果顯示,H2O2濃

3、度為500-900μmol/L時(shí),細(xì)胞存活率與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,損傷作用呈濃度依賴性,其中當(dāng)H2O2濃度為500μmol/L,細(xì)胞半數(shù)存活,為最佳氧化損傷模型;CCk-8結(jié)果顯示,LBP濃度為10μg/ml-5mg/ml時(shí),細(xì)胞存活率與對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而當(dāng)LBP濃度為10mg/ml時(shí),細(xì)胞活性受抑制;CCk-8結(jié)果顯示,LBP濃度為100-1000μg/ml時(shí),細(xì)胞存活率與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,其中 LBP濃度為500μg/ml時(shí),

4、保護(hù)效果最明顯;流式細(xì)胞儀雙染法檢測結(jié)果顯示,LBP干預(yù)組細(xì)胞凋亡比例明顯低于H2O2損傷組;實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示,LBP干預(yù)后細(xì)胞Bax表達(dá)降低,Bcl-2表達(dá)升高,與H2O2損傷組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;ELISA結(jié)果顯示CoCl2濃度為150μmol/L和450μmol/L時(shí),細(xì)胞VEGF分泌量與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,其中當(dāng)CoCl2濃度為150μmol/L時(shí),VEGF分泌量最高;實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示,LBP濃度為10μg/ml、25μg