視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞在有色光信號傳導(dǎo)中的作用.pdf

1、目的:研究視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞在有色光信號傳導(dǎo)中的作用,試從細(xì)胞生物學(xué)水平和分子生物學(xué)水平探討近視眼的發(fā)病機制.方法:酶分層消化法分離培養(yǎng)人胚和成人RPE細(xì)胞,通過生長數(shù)據(jù)的計算和生長曲線的繪制、形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)鑒定、透射電鏡檢查等方法分析RPE細(xì)胞的生物學(xué)特性;將人胚RPE細(xì)胞置于不同有色光線下培養(yǎng),通過生長曲線的繪制、流式細(xì)胞測定細(xì)胞周期等研究不同色光對人胚RPE細(xì)胞體外生長特性的影響;采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)測定不同有色光線

2、下培養(yǎng)的RPE細(xì)胞分泌的bFGF和TGF-β的量,并抽提細(xì)胞的總RNA,通過PCR擴增和瓊脂凝膠電泳檢測不同色光照射后RPE細(xì)胞TGF-β的mRNA表達(dá)水平,從而分析體外培養(yǎng)的RPE細(xì)胞在光信號傳導(dǎo)中的作用;通過對不同色光下飼養(yǎng)的幼豚鼠眼軸的測量、神經(jīng)視網(wǎng)膜層和視網(wǎng)膜色素上皮層中bFGF和TGF-β的檢測,探討不同波長的有色光線對眼球生長發(fā)育的影響,并進(jìn)一步分析動物模型中RPE細(xì)胞在有色光信號傳導(dǎo)中的作用.結(jié)果:體外培養(yǎng)的人胚RPE細(xì)胞

3、生長旺盛,超微結(jié)構(gòu)仍保持正常;不同有色光線下培養(yǎng)的RPE細(xì)胞周期和生長曲線均不同;ELISA結(jié)果顯示人胚RPE細(xì)胞可分泌bFGF和TGF-β,在受到不同波長的光照射后,不同時段bFGF和TGF-β的分泌量也不一樣,從不同色光照射24后的RPE細(xì)胞中提取總RNA,并以TGF-β為目的基因進(jìn)行擴增,結(jié)果顯示不同色光照射后RPE細(xì)胞TGF-β的mRNA表達(dá)水平不同;不同色光下飼養(yǎng)4周后幼豚鼠紅光照射組眼軸長度的變化與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義