可見(jiàn)光對(duì)體外培養(yǎng)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的氧化損傷和PEDF、TNF-α表達(dá)的影響.pdf

1、[目的]
　　 探討可見(jiàn)光（白光、紅光、藍(lán)光）對(duì)體外培養(yǎng)視網(wǎng)膜色素上皮（retinal pigmentepithelium，RPE）細(xì)胞的氧化損傷和對(duì)細(xì)胞8-羥基鳥(niǎo)嘌呤DNA糖苷酶1（human8-oxoguanine DNA glycosylasel，hOGGl）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosisfactor-α，TNF-α）及色素上皮細(xì)胞衍生因子（pigment epithelium-derived growt

2、hfactor，PEDF）表達(dá)的影響。
　　 [方法]
　　 光源置于培養(yǎng)箱頂部，光照在培養(yǎng)箱內(nèi)密閉進(jìn)行，光照時(shí)溫度變化36.5～37.2℃，細(xì)胞平面的光照強(qiáng)度為6001ux。實(shí)驗(yàn)分白光、紅光、藍(lán)光照射組和對(duì)照組，白光、紅光分別照射RPE細(xì)胞6h、12h、24h、48h，藍(lán)光照射RPE細(xì)胞1h、3h、6h、12h，對(duì)照組以錫箔紙包裹避光培養(yǎng)。以3-4，5-二甲基噻唑2-2，5-二苯基四氮唑溴鹽（3-4，5-dimethy

3、lthiazole-2-y1-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT）法檢冊(cè)細(xì)胞增殖情況；用2’，7’-二氯熒光素二乙酸酯（2’，7’-dichlorofluorescin-diacetate，DCFH-DA）法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（reactive oxygen species，ROS）的產(chǎn)生情況，并以免疫細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemi stry，ICC）法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)8-羥基鳥(niǎo)嘌呤（8-oxogu

4、anine，8-oxoG）的表達(dá)量，通過(guò)蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)hOGGl、TNF-α和PEDF的表達(dá)情況。上述每組實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)用x±s表示，多個(gè)組別間比較采用單因素方差分析（One WayANOVA），兩組資料的比較采用兩個(gè)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 [結(jié)果]
　　 MTT法顯示：①白光、紅光分別照射體外培養(yǎng)RP

5、E細(xì)胞，在所有觀察時(shí)間（6h、12h、24h、48h），與對(duì)照組相比均不影響ARPE-19細(xì)胞的增殖（P>0.05）；白光、紅光照射二組間差異不明顯（P>0.05）；②藍(lán)光照射體外培養(yǎng)RPE細(xì)胞1h、3h、6h，對(duì)細(xì)胞增殖無(wú)明顯影響（P>0.05），當(dāng)照射時(shí)間延長(zhǎng)至12h，細(xì)胞增殖出現(xiàn)抑制（P<0.05）。
　　 DCFH-DA法顯示：①白光、紅光分別照射體外培養(yǎng)RPE細(xì)胞6h，ROS表達(dá)量無(wú)明顯變化（P>0.05）；白光、紅光

6、分別照射12h、24h、48h，細(xì)胞ROS表達(dá)量均升高（P<0.05，P<0.01）；在所有觀察時(shí)間（6h、12h、24h、48h），白光、紅光照射組細(xì)胞ROS表達(dá)量隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加（白光F=11.611，P<0.01；紅光F=6.706，P<0.05）。②藍(lán)光作用體外培養(yǎng)RPE細(xì)胞1h、3h、6h、12h，均出現(xiàn)ROS表達(dá)量升高（P<0.05，P<0.01），且ROS表達(dá)量隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加（F=23.259，P<0.01）。
　

7、　 ICC法顯示：①白光、紅光分別照射體外培養(yǎng)RPE細(xì)胞6h，胞漿8-oxoG表達(dá)量無(wú)明顯變化（P>0.05）；白光、紅光分別照射12h、24h、48h，胞漿8-oxoG表達(dá)量增高（P<0.05，P<0.01）；8-oxoG表達(dá)量在12h、24h、48h隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，至48h有所降低但仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。②藍(lán)光照射組胞漿8-oxoG表達(dá)量在1h、3h均增高（P<0.01），光照至6h、12h，8-oxoG表達(dá)量有所降低

8、但較對(duì)照組差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　 Western Blot法顯示：①白光、紅光照射體外培養(yǎng)RPE細(xì)胞12h、24h、48h或藍(lán)光照射體外培養(yǎng)RPE細(xì)胞6h、12h，hOGGl表達(dá)量均增高（P<0.05、P<0.01）；②白光、紅光照射體外培養(yǎng)的RPE細(xì)胞12h、24h、48h或藍(lán)光照射體外培養(yǎng)RPE細(xì)胞6h、12h，TNF-α蛋白表達(dá)量均降低（P<0.05、P<0.01），而PEDF蛋白表達(dá)量均增高（P<0.