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文檔簡介
1、目的: 探討腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)或/和曲安奈德(triamcinolone acetonide,TA)對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞(cultured human retinal pigment epithelial cells-19,ARPE-19)活性氧(reactive oxygen species,ROS)、線粒體DNA損傷標記物二氫鳥嘌呤(8-oxo-7,8-dihyd
2、roguanine,8-oxoG)及DNA損傷修復標記物8-羥基鳥嘌呤DNA糖苷酶(human8-oxoguanine DNA glycosylasel,hOGG1)表達的影響。 方法: 體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細胞ARPE-19,培養(yǎng)液中加入TNF-α干預ARPE-19,分為50μg·L-1、100μg·L-1、200μg·L-1三個濃度,分別作用12h、24h,以2’,7’-二氯熒光素二乙酸酯(2’,7’-dichl
3、orofluorescin-diacetate,DCFH-DA)法檢測細胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生情況;培養(yǎng)液中加入TA干預ARPE-19,分為40μg·L-1、400μg·L-1、4000μg·L-1三個濃度,分別作用12h、24h,以DCFH-DA法檢測細胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生情況。以TNF-α(100μg·L-1)、TA(400μg·L-1)分別干預ARPE-1924h及以TNF-α(100μg·L-1)干預24h再以TA(400μg·L-1)干
4、預12h,以DCFH-DA法檢測細胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生情況,并以免疫細胞化學(immunocytochemistry,ICC)方法檢測細胞內(nèi)8-oxoG的表達情況,以蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測胞漿中hOGG1的表達情況。 結(jié)果: DCFH-DA法檢測細胞內(nèi)ROS顯示:①TNF-α(50μg·L-1、100μg·L-1、200μg·L-1)干預ARPE-1912h、24h后,細胞內(nèi)ROS表達量明顯增加(P
5、<0.01),以100μg·L-1的濃度干預時ROS表達水平最高,每組濃度下12、24h兩時間點ROS表達量無統(tǒng)計學差異(P>0.05),但各濃度24h ROS表達量均有增加的趨勢。②TA(40μg·L-1、400μg·L-1、4000μg·L-1)干預ARPE-1912h、24h,40μg·L-1、400μg·L-1這兩組在12h、24h ROS的表達量和空白對照組無明顯差異(P>0.05),但表達量有降低的趨勢,4000μg·L-1
6、組在12h、24h均出現(xiàn)ROS表達量增加(P<0.01)。 免疫細胞化學檢測顯示:①以TNF-α(100μg·L-1)干預ARPE-1924h,8-oxoG表達量明顯增加(P<0.01)。②以TA(400μg·L-1)干預ARPE-1924h,8-oxoG的表達無明顯變化(P>0.05)。 蛋白免疫印跡法檢測顯示:①以TNF-α,(100μg·L-1)干預ARPE-1924h發(fā)現(xiàn)hOGG1表達量明顯增加(P<0.01)。
7、②以TA(400μg·L-1)干預ARPE-1924h,hOGG1的表達無明顯變化(P>0.05)。 TNF-α(100μg·L-1)干預ARPE-1924h再以TA(400μg·L-1)干預12h,結(jié)果顯示ROS、8-oxoG的表達比TNF-α(100μg·L-1)單獨干預組明顯降低(P<0.01),hOGG1的表達比TNF-α(100μg·L-1)單獨干預組明顯增加(P<0.01)。 結(jié)論: ①TNF-α能
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