可見光誘導(dǎo)體外培養(yǎng)兔視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究可見光對(duì)體外培養(yǎng)的兔視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)細(xì)胞凋亡的影響.方法:用兩步酶法消化分離、培養(yǎng)并鑒定RPE細(xì)胞.以白色熒光燈為光源,用3652(±213)lux光照強(qiáng)度照射RPE細(xì)胞.細(xì)胞分為4個(gè)組,分別為無光照組(Ⅰ組)、光照3小時(shí)組(Ⅱ組)、6小時(shí)組(Ⅲ組)和9小時(shí)組(Ⅳ組).每組又分別在光照后3、12、24、72h終止培養(yǎng)進(jìn)行流式細(xì)胞儀AnnexinV-FITC/PI雙染

2、色流式細(xì)胞測(cè)定檢測(cè).其中各組培養(yǎng)24h細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞周期的測(cè)定,觀察RPE細(xì)胞的增殖狀態(tài)和凋亡情況;Ⅰ組和Ⅲ組光照前和光照后不同培養(yǎng)時(shí)刻點(diǎn)取細(xì)胞進(jìn)行Bcl-2mRNA原位雜交檢測(cè),觀察細(xì)胞bcl-2基因表達(dá)情況.選取部分Ⅲ24細(xì)胞進(jìn)行透射電鏡的觀察.結(jié)果:細(xì)胞光照后透射電鏡觀察到凋亡小體、核碎裂細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化.光照后3h,bcl-2mRNA原位雜交陽性細(xì)胞數(shù)無明顯改變;光照后12h,24h,72h陽性細(xì)胞逐漸減少(P<0.01).流式細(xì)胞

3、儀檢測(cè)結(jié)果顯示可見光損傷可引起RPE細(xì)胞凋亡與壞死.Ⅱ 24細(xì)胞凋亡率為(11.45±1.78)％,Ⅲ3細(xì)胞凋亡率為(5.80±0.77)％,Ⅲ24細(xì)胞凋亡率為(18.49±0.88)％.Ⅱ 12細(xì)胞壞死率為(1.12±0.56)％,Ⅱ 72細(xì)胞壞死率為(1.46±0.39)％,Ⅳ12細(xì)胞壞死率為(5.33±1.05)％.隨著光照時(shí)間和光照后培養(yǎng)時(shí)間的延長,細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞壞死率亦逐漸升高,比較組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).短時(shí)

4、間(3h,6h)光照主要引起細(xì)胞凋亡,而長時(shí)間(9h)光照細(xì)胞壞死更明顯.光照后較短培養(yǎng)時(shí)間(3h,12h,24h)主要是細(xì)胞凋亡,而培養(yǎng)較長時(shí)間(72h)壞死顯著增加.隨著光照時(shí)間的延長,細(xì)胞增殖指數(shù)下降,凋亡率增加(P<0.05).結(jié)論:一定強(qiáng)度的可見光照射可引起體外RPE的凋亡.可見光損傷可引起細(xì)胞凋亡及壞死,其程度隨著光照時(shí)間和光照后培養(yǎng)時(shí)間的延長而增加.細(xì)胞凋亡在一定條件下可轉(zhuǎn)化為細(xì)胞壞死.一定程度的光照可以影響細(xì)胞進(jìn)入其細(xì)胞