維拉帕米誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文維拉帕米誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮細胞凋亡的實驗研究姓名：王朋申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：洪晶20030401板內(nèi)，待細胞融合后，胰酶傳代。三、MrITI、比色法測定藥物對RPE增生的影響將第3代RPE細胞以2104個／1001Ll的細胞密度接種于96孔塑料培養(yǎng)板中，加入40mg／L，80mg／L，160mg／L，320mg／L的維拉帕米，培養(yǎng)24小時后，應(yīng)用MTr比色法，在全自動酶標(biāo)儀上測其在490nm處

2、的吸光值A(chǔ)。計算細胞增生抑制率，并對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。四、凋亡的檢測將第3代的RPE細胞分三組進行凋亡檢測。第一和第二組分別加入維拉帕米80mg／L和160mg／L，第三組作為對照組未加藥。采用HE染色、AO熒光染色以及透射電鏡進行觀察。以80mg／L，1601119／L濃度的維拉帕米，作用12—72小時后，加入PI染液后，經(jīng)流式細胞儀檢測。通過計算凋亡區(qū)(亞二倍體峰)細胞所占百分比得出凋亡率。結(jié)果在測定藥物對RPE增生影響的實驗中，

3、細胞抑制率分別為1355％、1671％、4234％和510l％，隨著濃度增大，細胞抑制率不斷上升，結(jié)合方差分析和t檢驗證明維拉帕米對人RPE細胞增殖有明顯的抑制作用，且呈明顯的劑量依賴關(guān)系。結(jié)合光鏡、電鏡、熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測凋亡所得結(jié)果為80mg／l和160mg／l維拉帕米均可誘導(dǎo)RPE凋亡。在同一濃度時，隨著時間延長，凋亡率不斷增加，在同一時間內(nèi)，藥物濃度增加，凋亡率也不斷增大，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析證明其差異具有顯著性。結(jié)果顯示160