核受體VDR在高糖誘導(dǎo)人血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激中的作用及機(jī)制.pdf

1、目的:流行病學(xué)資料顯示維生素D缺乏能促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展,從而增加心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。維生素D介導(dǎo)一系列生活學(xué)效應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中可能起著很重要的保護(hù)作用,但維生素D抗動(dòng)脈粥樣硬化的具體機(jī)制尚不清楚。維生素D受體(VDR)在調(diào)控基因表達(dá)中需與視黃醇X受體(RXR)形成異源二聚體,共同調(diào)節(jié)多種基因的表達(dá)。我們前期已經(jīng)發(fā)現(xiàn)RXR可能是機(jī)體抗動(dòng)脈粥樣硬化的重要內(nèi)源性保護(hù)因素。因此本研究對(duì)VDR激動(dòng)劑1,25(OH)2D3在高糖誘導(dǎo)人

2、臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)產(chǎn)生的氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡過(guò)程中的作用和機(jī)制,以及與RXR信號(hào)通路之間的相互關(guān)系進(jìn)行探討。
　　方法:本研究中采用原代培養(yǎng)的HUVECs,通過(guò)流式細(xì)胞學(xué)方法和熒光顯微鏡檢測(cè)HUVECs凋亡率和細(xì)胞內(nèi)的活性氧離子(ROS)水平,分別應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和免疫印跡雜交的方法檢測(cè)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亞基p22phox和gp91phox的表達(dá)水平,用免疫印跡雜交方法檢測(cè)活化的PKC

3、、caspase-3的蛋白表達(dá)水平。利用干擾RNA(SiRNA)技術(shù)分別沉默VDR或RXRα基因,研究VDR信號(hào)通路與RXR信號(hào)通路之間的相互作用關(guān)系。
　　結(jié)果:(1)高糖處理后HUVEC凋亡百分率和caspase-3蛋白表達(dá)顯著增加,細(xì)胞ROS水平顯著上升。高糖處理顯著上調(diào)NADPH氧化酶p22phox和gp91phox亞基的mRNA和蛋白表達(dá)水平。(2)1,25(OH)2D3和RXR激動(dòng)劑9-cis-RA均能抑制高糖誘導(dǎo)的c

4、aspase-3蛋白表達(dá)、內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、ROS生成、PKC的活化,以及NADPH氧化酶p22phox和gp91phox亞基mRNA和蛋白水平的表達(dá),并且兩者聯(lián)合干預(yù)具有協(xié)同抑制效應(yīng)。(3)預(yù)先轉(zhuǎn)染VDRsiRNA,1,25(OH)2D3抑制高糖誘導(dǎo)下caspase-3蛋白表達(dá)、內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、ROS生成、PKC的活化、p22phox和gp91phox亞基表達(dá)的作用明顯減弱,而預(yù)先轉(zhuǎn)染RXRαsiRNA,1,25(OH)2D3抑制作用無(wú)明顯

5、影響。(4)然而當(dāng)預(yù)先轉(zhuǎn)染VDRsiRNA再用9-cis-RA干預(yù),9-cis-RA抑制氧化應(yīng)激和內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用減弱。
　　結(jié)論:(1)VDR激動(dòng)劑1,25(OH)2D3和RXR激動(dòng)劑9-cis-RA均能抑制高糖誘導(dǎo)人血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡和氧化應(yīng)激反應(yīng),并且兩者聯(lián)合干預(yù)具有協(xié)同抑制效應(yīng)。(2)1,25(OH)2D3可能通過(guò)VDR—PKC—NADPH氧化酶—ROS信號(hào)通路抑制高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡。(3)9-cis-