雌激素受體GPR30在糖尿病大鼠血管內(nèi)皮功能紊亂及高糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的保護(hù)作用.pdf

1、研究背景及目的
　　糖尿病可引起血管功能改變，造成血管損傷從而增加心血管疾病的發(fā)病率，在絕經(jīng)期婦女尤為顯著。采用雌激素替代治療（HRT）可顯著降低糖尿病及其心血管并發(fā)癥的發(fā)病率，成為絕經(jīng)期婦女預(yù)防和治療糖尿病及心血管疾病的有效措施。但目前臨床應(yīng)用的雌激素替代治療有非特異性作用帶來的弊端。雌激素受體GPR30是近些年發(fā)現(xiàn)并確立的第三類雌激素膜受體。目前已有文獻(xiàn)報(bào)道，GPR30特異性激動(dòng)劑G1可使動(dòng)脈血管產(chǎn)生內(nèi)皮依賴性舒張，同時(shí)給予一

2、氧化氮合酶阻斷劑（L-NAME）后這種血管舒張作用得到有效地阻斷，提示激動(dòng)GPR30可通過促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮（NO）的釋放達(dá)到舒張血管的作用。在糖尿病狀態(tài)下血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生功能上的障礙甚至凋亡，導(dǎo)致NO水平明顯降低。而目前已證實(shí)NO在維持血管內(nèi)皮細(xì)胞功能方面起到重要作用。同時(shí)有研究表明GPR30缺陷的雌性小鼠表現(xiàn)出高血糖、糖耐量降低、阻礙骨骼生長(zhǎng)和血壓升高，從而提示GPR30可能在調(diào)控胰腺β細(xì)胞釋放胰島素的方面起到重要作用[1]。

3、據(jù)此本課題推測(cè)雌激素受體GPR30的激活有可能抑制糖尿病導(dǎo)致的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，提示其有潛在的防治糖尿病心血管并發(fā)癥的作用。本課題研究GPR30對(duì)糖尿病引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用與機(jī)制，為預(yù)防糖尿病和絕經(jīng)后婦女心血管損傷提供新的藥物作用靶點(diǎn),為探索新的選擇性雌激素心血管保護(hù)策略提供理論依據(jù)。
　　研究方法
　　本實(shí)驗(yàn)分別采用實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠模型以及高糖損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞來評(píng)價(jià)GPR30的體內(nèi)體外作用。采用離體血管灌流、比色

4、法、PI-Hoechst33258雙染、MTT、免疫熒光染色、蛋白免疫印跡（Westernblot）等技術(shù)，觀察：①GPR30對(duì)糖尿病大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響；②GPR30在血管內(nèi)皮細(xì)胞的定位分析；③GPR30對(duì)高糖引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響；④GPR30對(duì)PI3K-AKT-eNOS生存信號(hào)通路的影響。
　　研究結(jié)果
　　1．GPR30特異性激動(dòng)劑（G1）可使雌性卵巢切除大鼠及糖尿病雌性卵巢切除大鼠主動(dòng)脈血管產(chǎn)生濃度依賴性舒

5、張作用；同時(shí)，G1可降低因去氧腎上腺素（PE）誘導(dǎo)的糖尿病雌性卵巢切除大鼠主動(dòng)脈血管濃度依賴性收縮作用；G1的這些作用可被L-NAME（一氧化氮合酶抑制劑）及G15（GPR30特異性阻斷劑）阻斷；
　　2．長(zhǎng)期給予G1能有效保護(hù)的糖尿病大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張功能；
　　3．G1可有效阻礙高糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，同時(shí)可增強(qiáng)p-Akt和p-eNOS表達(dá)、促使NO合成，PI3K阻斷劑LY294002及G15可有效阻斷G1的抗