血管周圍脂肪組織在尼古丁誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用.pdf

1、吸煙嚴(yán)重威脅人類健康，可導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的發(fā)生，而動(dòng)脈粥樣硬化性疾病又是導(dǎo)致全球死亡的主要危險(xiǎn)因素。吸煙使動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的發(fā)生率和病死率增高2-6倍。尼古丁(Nicotine)作為煙草中的主要毒性堿成分，被認(rèn)為是引起心血管損害的主要物質(zhì)。以往研究多集中在吸煙對(duì)血管內(nèi)皮的直接損傷進(jìn)而引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的發(fā)生，而血管周圍脂肪組織在內(nèi)皮細(xì)胞損傷中所起到的作用尚未得到進(jìn)一步研究。近年來，隨著對(duì)脂肪組織研究的深入，以及心血管疾病發(fā)病

2、率的急劇增加，血管周圍脂肪組織(Perivascular adipose tissue，PVAT)因與血管外膜間不存在任何解剖學(xué)屏障，逐漸成為學(xué)者們關(guān)注的重點(diǎn)。因此，本研究主要從尼古丁誘導(dǎo)的NF-κB通路和細(xì)胞凋亡水平，研究PVAT與血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的相關(guān)性。通過體外細(xì)胞培養(yǎng)，分析尼古丁刺激條件下內(nèi)皮細(xì)胞、血管周圍脂肪細(xì)胞及內(nèi)皮-脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)后，NF-κB通路相關(guān)蛋白的變化情況，以及各細(xì)胞的凋亡情況，確定尼古丁對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的促凋亡作

3、用和PVAT對(duì)其凋亡的調(diào)控作用及其作用機(jī)制。明確血管周圍脂肪組織在血管內(nèi)皮損傷中的作用，及其在動(dòng)脈粥樣硬化性疾病中的作用。
　　用10-6mol·L-1，10-7mol·L-1和10-8mol·L-1濃度的尼古丁分別處理內(nèi)皮細(xì)胞和脂肪細(xì)胞，AnnexinⅤ-FITC檢測細(xì)胞凋亡。此外，本研究創(chuàng)新性的利用transwell培養(yǎng)板構(gòu)建內(nèi)皮細(xì)胞-脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)體系，10-6mol·L-1的尼古丁處理內(nèi)皮-脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)體系后，同樣的方法

4、檢測共培養(yǎng)細(xì)胞凋亡。同時(shí)用qRT-PCR和western blot的方法分別檢測IKKβ、NF-κB p65和IkBα的基因和蛋白表達(dá)情況，并通過免疫熒光的方法檢測NF-κB p65的核轉(zhuǎn)移變化。
　　本研究結(jié)果表明，尼古丁對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞和脂肪細(xì)胞的促凋亡作用具有濃度依賴性，能夠作用于NF-κB信號(hào)通路來調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡。其中內(nèi)皮細(xì)胞中10-6mol·L-1處理組細(xì)胞凋亡較對(duì)照組明顯增加(P＜0.01)。相比之下脂肪細(xì)胞對(duì)尼古丁的反應(yīng)較為

5、敏感，不同作用濃度下其細(xì)胞凋亡較對(duì)照組均明顯增加(P＜0.05)。且無論是在基因還是蛋白水平，尼古丁處理后內(nèi)皮細(xì)胞和脂肪細(xì)胞中IKKβ和NF-κB p65的表達(dá)量較對(duì)照組增加(P＜0.01;P＜0.05)。而共培養(yǎng)后的兩種細(xì)胞其細(xì)胞凋亡數(shù)目均較單純培養(yǎng)組明顯增加(P＜0.01;P＜0.05)。但I(xiàn)KKβ、NF-κB p65和IkBα的表達(dá)量的變化情況以共培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞的變化為主。共培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞中IKKβ、NF-κB p65的表達(dá)較單獨(dú)培養(yǎng)

6、內(nèi)皮細(xì)胞明顯增加，IkBα明顯減少(P＜0.05)。同時(shí)，NF-κB p65的核轉(zhuǎn)移也較單獨(dú)培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞明顯增加。此外，NF-κB信號(hào)通路抑制劑PDTC處理內(nèi)皮細(xì)胞和脂肪細(xì)胞后細(xì)胞凋亡數(shù)目明顯減少(P＜0.05)。
　　一定濃度的尼古丁通過激活NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)NF-κB的磷酸化，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞的過度凋亡和成熟脂肪細(xì)胞過度凋亡甚至壞死。且脂肪細(xì)胞經(jīng)尼古丁染毒后能夠進(jìn)一步激活內(nèi)皮細(xì)胞中NF-κB信號(hào)通路，進(jìn)而加重尼古丁對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞