血管周圍脂肪組織在尼古丁誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用.pdf

1、目的:吸煙是動(dòng)脈粥樣硬化最重要的危險(xiǎn)因素之一，煙霧中的尼古丁(Nicotine)被認(rèn)為是引起心血管損害的主要物質(zhì)之一。以往研究主要集中在吸煙通過直接損傷血管內(nèi)皮從而引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化，近年來，多項(xiàng)研究證實(shí)血管周圍脂肪組織(Perivascular adipose tissue，PVAT)可分泌多種細(xì)胞因子，參與PVAT與血管之間的內(nèi)環(huán)境調(diào)節(jié)作用。因此我們提出假設(shè):尼古丁刺激后的血管損傷除了尼古丁對(duì)血管內(nèi)皮的直接損傷外，可能還存在通過尼古丁

2、的刺激后PVAT內(nèi)分泌及旁分泌功能改變，造成細(xì)胞因子和炎癥因子的分泌異常，進(jìn)而影響血管壁本身的結(jié)構(gòu)與功能，最終促進(jìn)內(nèi)膜損傷。因此，我們?cè)O(shè)計(jì)了本課題來研究尼古丁刺激條件下體外培養(yǎng)的血管周圍脂肪細(xì)胞的脂肪因子及炎性因子水平的變化，證實(shí)上述改變對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響
　　方法:首先單獨(dú)培養(yǎng)脂肪細(xì)胞，將尼古丁稀釋成終濃度為10-6mol/l、10-7 mol/l、10-8 mol/l。分別用上述三個(gè)濃度的尼古丁處理脂肪細(xì)胞24小時(shí)后

3、提取上清，用ELISA檢測(cè)IL-1β，IL-6，TNF-α和脂聯(lián)素的分泌量。利用同樣濃度的尼古丁處理內(nèi)皮細(xì)胞24小時(shí)后提取上清，用ELISA檢測(cè)IL-1β，IL-6，TNF-α的分泌量。最后利用transwell培養(yǎng)板構(gòu)建脂肪細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)體系后，用10-6 mol/l濃度的尼古丁處理脂肪細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)體系。Western-blot方法檢測(cè)NF-kB-p65的磷酸化水平，粘附因子VCAM-1、ICAM-1表達(dá)水平，再給予NF

4、-kB抑制劑PDTC預(yù)處理共培養(yǎng)體系1小時(shí)后ELISA檢測(cè)共培養(yǎng)體系中IL-1β，IL-6，TNF-α和脂聯(lián)素的分泌量，Western-blot方法檢測(cè)粘附因子VCAM-1，ICAM-1表達(dá)水平。
　　結(jié)果:尼古丁單獨(dú)刺激脂肪細(xì)胞后，脂聯(lián)素的表達(dá)量隨尼古丁濃度的增加顯著降低(P＜0.05)，IL-1β和IL-6的表達(dá)量在尼古丁濃度為10-6、10-7mol/l時(shí)顯著增加(P＜0.01)，10-8 mol/l濃度時(shí)，表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照

5、組無變化(P＞0.05)。尼古丁濃度為10-7、10-8 mol/l時(shí)，TNF-α的表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組無變化(P＞0.05)，10-6mol/l時(shí)，表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組有顯著增加(P＜0.01)。尼古丁單獨(dú)刺激內(nèi)皮細(xì)胞后，IL-1β和IL-6的表達(dá)量隨著尼古丁濃度的增加而增加(P＜0.05)。而TNF-α的表達(dá)在各尼古丁處理組間無變化(P＞0.05)。尼古丁刺激脂肪細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)系統(tǒng)后，IL-1β和IL-6的表達(dá)量相對(duì)于單獨(dú)培養(yǎng)組有

6、顯著上升(P＜0.05)、TNF-α的表達(dá)量相對(duì)于單獨(dú)培養(yǎng)脂肪組和內(nèi)皮組其表達(dá)量也有顯著上升。(P＜0.05)、脂聯(lián)素的表達(dá)量相對(duì)于單獨(dú)培養(yǎng)脂肪細(xì)胞組分泌量進(jìn)一步下降，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Western blot結(jié)果顯示脂肪細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)組的NF-kB p65的表達(dá)高于單獨(dú)培養(yǎng)脂肪細(xì)胞組和單獨(dú)培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞組(P＜0.01)，脂肪細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)組的VCAM-1、ICAM-1表達(dá)高于單獨(dú)培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞組(P＜0.01

7、)。NF-kB抑制劑PDTC(100um)預(yù)處理脂肪細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)體系1小時(shí)后，脂肪細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)系統(tǒng)IL-1β、IL-6和TNF-α的表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組有顯著上升(P＜0.05)，共培養(yǎng)+PDTC培養(yǎng)組IL-1β、IL-6和TNF-α的表達(dá)量相對(duì)于共培養(yǎng)組有明顯下降趨勢(shì)(P＜0.05)。脂聯(lián)素的表達(dá)量，共培養(yǎng)+PDTC培養(yǎng)組相對(duì)于共培養(yǎng)組其表達(dá)量有顯著上升(P＜0.05)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western blot結(jié)果顯示

8、經(jīng)尼古丁刺激后，共培養(yǎng)+PDTC培養(yǎng)組相對(duì)于共培養(yǎng)組VCAM-1、ICAM-1表達(dá)量顯著降低。(P＜0.01)。
　　結(jié)論:尼古丁的刺激可改變PVAT內(nèi)分泌及旁分泌功能改變，造成細(xì)胞因子和炎癥因子脂聯(lián)素、 IL-1β、IL-6和TNF-α的異常分泌，進(jìn)而加劇內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)，最終導(dǎo)致內(nèi)膜功能障礙。
　　尼古丁能激活炎癥信號(hào)分子NF-kB來促進(jìn)脂肪細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)體系促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的異常分泌、粘附