糖康對糖尿病大鼠和血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：從整體，細(xì)胞及分子水平，研究糖康對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織和高糖環(huán)境培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV-304)的作用及其機(jī)制研究。方法：1)動物實驗：60只雄性Wistar大鼠隨機(jī)選取10只作為正常對照組，50只大鼠用鏈脲佐菌素(STZ50mg/kg)一次性腹腔注射的方法建立糖尿病動物模型。造模成功后又隨機(jī)分為糖康高、中。低劑量組和達(dá)納康組。采用消化鋪片方法觀察大鼠視網(wǎng)膜微血管組織形態(tài)變化；化學(xué)比色法檢測大鼠視網(wǎng)膜組織及血清中丙二醛(M

2、alondialdehyde，MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活性。采用western blot、RT-PCR技術(shù)分別檢測視網(wǎng)膜組織中NF-κB p65蛋白表達(dá)及NF-κB、IL-1β、BAX和VEGF基因的表達(dá)；2)細(xì)胞試驗：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV-304)，用不同濃度的葡萄糖培養(yǎng)液干預(yù)48h至96h后用四甲基偶氮唑藍(lán)法(MTT)檢測不同濃度的葡萄糖對細(xì)胞增殖能力的影響；采用化學(xué)比色法檢測細(xì)胞中的MDA和還原型谷胱甘

3、肽(GSH)含量。運用血清藥理學(xué)方法制備不同濃度的糖康含藥血清，采用MTT法檢測各組糖康含藥血清對細(xì)胞增殖的影響，取各組細(xì)胞進(jìn)一步檢測MDA和GSH含量。結(jié)果：1)動物實驗：通過STZ誘導(dǎo)糖尿病動物模型，造模一周左右即出現(xiàn)糖尿病典型的“三多，一少”癥狀。與模型組比較糖康高劑量與低劑量組癥狀明顯減輕，而達(dá)納康組和糖康低劑量組癥狀無改善。與正常對照組比較模型組和糖康各治療組大鼠體重明顯降低而血糖顯著升高(P<0.01)。與正常組比較，模型組

4、大鼠視網(wǎng)膜呈現(xiàn)較多的無細(xì)胞毛細(xì)血管條索數(shù)(約為正常組的5.33倍)。糖康高劑量組和中劑量組與模型組比較無細(xì)胞毛細(xì)血管數(shù)顯著減少(P<0.01)，糖康各治療組大鼠視網(wǎng)膜組織和血清中SOD活力逐步上升，MDA含量降低。與模型組比較各治療組大鼠視網(wǎng)膜組織中NF-κB P65蛋白和NF-κB、IL-1β、BAX和VEGF基因的表達(dá)明顯下調(diào)，以糖康高劑量組效果顯著(P<0.01)；2)細(xì)胞試驗：隨葡萄糖濃度的升高和培養(yǎng)時間的延長各組細(xì)胞OD值明顯

5、降低(P<0.01)，胞內(nèi)MDA含量增加和GSH含量降低(P<0.01)，具有明顯的時間和濃度依賴性。與模型組比較，糖康含藥血清各治療組明顯抑制細(xì)胞增殖，不同程度的降低細(xì)胞內(nèi)MDA含量和提高GSH含量，以糖康高劑量組效果明顯(P<0.01)。結(jié)論：1)糖康能夠改善DM大鼠的一般癥狀，從病理形態(tài)學(xué)觀察視網(wǎng)膜微血管可減輕糖尿病大鼠早期視網(wǎng)膜病變微血管的損傷；2)糖康能顯著增加糖尿病大鼠血清及視網(wǎng)膜組織中SOD活性，降低MDA含量；3)糖康能