糖尿病腎病腎小球細(xì)胞間相互作用——氧化應(yīng)激、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和內(nèi)皮細(xì)胞.pdf

1、目的：觀(guān)察高糖和氯沙坦對(duì)培養(yǎng)的人腎小球系膜細(xì)胞、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的SOD、CAT活性、MDA水平和VEGFmRNA表達(dá)與蛋白分泌的影響，以探討高糖在糖尿病腎病發(fā)生、發(fā)展中的機(jī)制及氯沙坦防治糖尿病腎病的作用;觀(guān)察高糖條件下系膜細(xì)胞對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的SOD、CAT活性、MDA水平和VEGFmRNA表達(dá)與蛋白分泌的影響，從而探討細(xì)胞間相互作用在糖尿病腎病發(fā)生、發(fā)展中的意義。 方法：采用內(nèi)皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)或內(nèi)皮細(xì)胞和系膜細(xì)胞共培養(yǎng)法，

2、將培養(yǎng)細(xì)胞分為正常對(duì)照組、高糖組、氯沙坦干預(yù)組和氯沙坦對(duì)照組，分別在培養(yǎng)的不同時(shí)間點(diǎn)，應(yīng)用比色法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中SOD、CAT活性和MDA水平、RT-PCR方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的VEGFmRNA表達(dá)水平及ELISA方法測(cè)定細(xì)胞VEGF蛋白的分泌。 結(jié)果：?jiǎn)为?dú)培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞高糖組上清液SOD、CAT活性比正常對(duì)照組明顯降低，MDA含量明顯升高(P＜0.05)；氯沙坦干預(yù)組SOD、CAT活性比高糖組明顯升高(P＜0.05)，

3、MDA含量明顯降低。 在3、6、12小時(shí)，單獨(dú)培養(yǎng)的系膜細(xì)胞高糖組VEGFmRNA表達(dá)比正常對(duì)照組顯著增加，氯沙坦干預(yù)組VEGFmRNA表達(dá)則下調(diào)；3，6，12，24小時(shí)，單獨(dú)培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞高糖組VEGFmRNA表達(dá)高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，氯沙坦干預(yù)組VEGFmRNA表達(dá)明顯降低。6、12、24小時(shí)，單獨(dú)培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞高糖組VEGF蛋白分泌增加(P＜0.05)，氯沙坦干預(yù)組VEGF蛋白分泌明顯降低;內(nèi)皮細(xì)胞和系膜細(xì)胞共培

4、養(yǎng)時(shí)，各組上清液SOD、CAT、MDA變化與單獨(dú)培養(yǎng)基本一致。即在二者共培養(yǎng)時(shí)，高糖組與正常對(duì)照組相比VEGFmRNA表達(dá)明顯升高(P＜0.05)，氯沙坦干預(yù)組VEGFmRNA表達(dá)明顯降低；VEGF蛋白分泌在高糖組中明顯升高，氯沙坦干預(yù)組明顯降低(P＜0.05);內(nèi)皮細(xì)胞和系膜細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)、共培養(yǎng)結(jié)果表明，共培養(yǎng)上清液中的SOD、CAT、MDA值、VEGFmRNA和蛋白分泌均高于相應(yīng)的單獨(dú)培養(yǎng)組。 結(jié)論：高糖可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞和系膜