轉(zhuǎn)化生長因子β-,1-聯(lián)合血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子體外誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化.pdf

1、目的：觀察胚胎干細(xì)胞在體外不同條件下定向誘導(dǎo)分化血管內(nèi)皮細(xì)胞的能力。 方法：成年昆明小鼠由南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)部提供，經(jīng)自然交配懷孕。取12.5～14.5d胎鼠，制作小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層。在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層上培養(yǎng)擴(kuò)增129×1/SvJ胚胎干細(xì)胞。將飼養(yǎng)層上擴(kuò)增的胚胎干細(xì)胞以0.25％胰酶消化，按1×10 4/ml胚胎干細(xì)胞懸液懸滴在細(xì)胞培養(yǎng)皿的蓋上，每滴10～20 μL，不換液，3d后形成擬胚體。挑選狀態(tài)好的擬胚體

2、分3組：①轉(zhuǎn)化生長因子β1誘導(dǎo)組、②血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)組、③轉(zhuǎn)化生長因子β1＋血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)組。采用RT—PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)方法證實(shí)誘導(dǎo)的細(xì)胞是否為內(nèi)皮細(xì)胞。 結(jié)果： ①在存在MEF飼養(yǎng)層并加LIF時(shí)，體外支持ES細(xì)胞的生長擴(kuò)增，能維持ES細(xì)胞迅速生長而未見明顯的分化。ES細(xì)胞特點(diǎn)：在MEF飼養(yǎng)層上形成的ES細(xì)胞克隆，結(jié)構(gòu)致密，似鳥巢狀。 ②3組中擬胚體貼壁后第2天，胚體均略攤開，周圍有上皮樣細(xì)

3、胞出現(xiàn)，第3，4天有許多卵石樣細(xì)胞產(chǎn)生，至第6天開始出現(xiàn)由卵石樣細(xì)胞構(gòu)成的管狀結(jié)構(gòu)，誘導(dǎo)時(shí)間約2周。轉(zhuǎn)化生長因子β1＋血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)組中產(chǎn)生的管樣結(jié)構(gòu)的擬胚體數(shù)較轉(zhuǎn)化生長因子β1誘導(dǎo)組、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)組多。三組均數(shù)分別為44.67±3.88、28.17±6.08和33.00±2.68。 ③3組中誘導(dǎo)分化的卵石樣細(xì)胞形態(tài)漸呈梭形，RT—PCR檢測可有特異性的擴(kuò)增條帶出現(xiàn)，與DNAmark相比較，條帶位置相符。擴(kuò)