血管內(nèi)皮細胞生長因子調(diào)節(jié)腫瘤細胞多藥耐藥相關(guān)蛋白1表達的研究.pdf

1、江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文血管內(nèi)皮細胞生長因子調(diào)節(jié)腫瘤細胞多藥耐藥相關(guān)蛋白1表達的研究姓名：李娟申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：許文林20100610江蘇大學(xué)碩士論文胃癌B G C ．8 2 3 細胞為模型，分三組：一組常規(guī)培養(yǎng)2 4h ，另一組采用V E G F 作用2 4 h ，最后一組L Y 2 9 4 0 0 2 預(yù)處理lh 后再加V E G F 作用2 4 h ，W e s t e r nb l o t 法分別檢測各實驗組M

2、 R P l 、A k t 、P 。A k t 及S P l蛋白表達水平，凝膠遷移滯后實驗( E M S A ) 方法檢測各實驗組轉(zhuǎn)錄因子S P l 與D N A 的結(jié)合活性。4 ．構(gòu)建含M R P l 基因啟動子區(qū)S P l結(jié)合位點突變序列的重組熒光素酶報告基因載體( P G L 3 ．B a s i c ．M R P l m ) ，脂質(zhì)體2 0 0 0 將重組的報告基因載體與內(nèi)參質(zhì)粒p ．半乳糖苷酶( p ．g a l ) 瞬時共同

3、轉(zhuǎn)染人胃癌B G C 一8 2 3 細胞，熒光素酶活性分析突變后的M R P l 基因啟動子活性的改變及V E G F 對其轉(zhuǎn)錄活性的影響。結(jié)果：1 ．q R T - P C R 結(jié)果顯示：在K 5 6 2 細胞株及B G C ．8 2 3 細胞株中，V E G F 均能上調(diào)M R P l m R N A 的表達，且呈較好的量效關(guān)系，V E G F 3 2n g ／m L 組M R P lm R N A 表達量分別為未處理組的2 ．0

4、倍、3 ．5 倍( P < o ．0 1 ) ；W e s t e r nb l o t 發(fā)現(xiàn)M R P l 蛋白表達與其m R N A 表達水平變化基本相一致。2 ．酶切鑒定和D N A 序列分析表明成功的構(gòu)建了重組P G L 3 ．B a s i c ．M R P l w 熒光素酶報告基因載體；熒光素酶活性分析表明重組的報告基因載體在B G C ．8 2 3 細胞中具有啟動子活性( 1 4 4 + 6 ．8 8 8 ) ，是空

5、載體P G L 3 ．B a s i c 轉(zhuǎn)錄活性( 6 0 - a ：4 ．9 1 0 ) 的2 ．4 倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義( P < O ．0 1 ) ；V E G F 作用1 2 h 后能以劑量依賴的方式上調(diào)M R P l 啟動子區(qū)的轉(zhuǎn)錄活性( r = O ．9 4 4 ，P < 0 ．0 1 ) ，與無V E G F作用組( 1 7 1 + 6 ．0 8 3 ) 相比，V E G F 3 2 n g ／m L 作用組