血管內皮細胞生長因子與造血調控的實驗研究.pdf

1、骨髓微血管內皮細胞(bonemarrowmicrovascularendothelialcell,BMEC)和血管內皮細胞生長因子(vascularenthelialgrowthfactor,VEGF)是骨髓造血微環(huán)境(hematopoieticinductivemicroenvironment,HIM)的重要組成部份,密切參與機體造血調控過程.骨髓微血管內皮細胞不僅構成骨髓的髓-血屏障,還介導造血細胞的歸巢,分泌造血刺激因子支持造血;

2、血管內皮細胞生長因子通過位于造血細胞和內皮細胞表面的受體發(fā)揮直接和間接造血調控作用.然而大量研究證實放化療過程可以導致造血微血管的損傷,影響造血干祖細胞的歸巢和造血恢復.為了進一步觀察血營內皮細胞生長因子在機體生后造血調控中的作用,我們將首先研究血管內皮細胞生長因子對造血細胞集落生成能力和內皮細胞基因表達譜的影響,繼而通過腺病毒介導的基因轉移觀察血管內皮細胞生長因子對骨髓移植小鼠造血恢復和微血管損傷修復的促進作用.該文分五部分:第一部分

3、VEGF對小鼠CFU-GM、CFU- E和CFU-S形成能力的維持和促進作用; 目的:探討重組人血管內皮細胞生長因子對小鼠CFU-GM、CFU-E和CFU-S生成能力的影響.結論:VEGF不僅能夠維持造血細胞集落生成能力,而且可以促進造血細胞體外集落形成的數(shù)量.第二部分利用基因芯片技術觀測VEGF對內皮細胞 基因表達譜的影響; 目的:探討利用基因芯片技術研究血管內皮細胞的基因表達情況,并觀測內皮細胞生長因子對人臍靜脈內皮細胞基因表達譜的

4、影響.結論:利用基因芯片技術在短時間內迅速而準確地分析了內皮細胞大量的基因表達情況,證實了內皮細胞表達眾多的造血生長因子及VEGF對內皮細胞基因表達譜的影響,為進一步研究VEGF和內皮細胞的生物學特性提供了有效手段.第三部分重組腺病毒AdEGFP/hVEGF<,165>的快速構建及其相關特性的體外研究; 目的:利用細菌內同源重組法快速構建增強型綠色熒光蛋白(EGFP)標記的人血管內皮細胞生長因子165(hVEGF<,165>)重組腺病毒

5、載體,并對其相關特性進行體外研究. 結論:利用細菌內同源重組法構建腺病毒載體具有高效、省時省力的特點,輔以EGFP為標記基因可以直觀檢測靶細胞感染和外源基因的表達情況,利用該法構建的重組腺病毒載體Ad-EGFP/hVEGF<,165>能夠有效感染靶細胞,高效表達活性產物hVEGF<,165>.該載體的成功構建提供了有效的基因轉移手段,為深入研究VEGF在機體內的造血調控作用奠定了良好基礎.第四部分腺病毒介導的hVEGFI65基因在骨髓

6、移植小鼠體內的表達及對造血重建的影響; 目的:探討重組腺病毒Ad-EGFP/hVEGF165介導的血管內皮細胞生長因子在骨髓移植后小鼠體內表達的分布情況、表達效率及安全性,并證實血管內皮細胞生長因子對骨髓移植小鼠造血重建的促進作用.結論:腺病毒成功介導了hVEGF165基因在骨髓移植小鼠體內的穩(wěn)定表達,明顯促進骨髓移植小鼠造血重建能力.第五部分hVEGF165基因轉移對骨髓移植小鼠骨髓微血管損傷的修復和重塑作用.目的:探討血管內皮細胞生