血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子與造血調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、骨髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞(bonemarrowmicrovascularendothelialcell,BMEC)和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascularenthelialgrowthfactor,VEGF)是骨髓造血微環(huán)境(hematopoieticinductivemicroenvironment,HIM)的重要組成部份,密切參與機(jī)體造血調(diào)控過(guò)程.骨髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞不僅構(gòu)成骨髓的髓-血屏障,還介導(dǎo)造血細(xì)胞的歸巢,分泌造血刺激因子支持造血;

2、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子通過(guò)位于造血細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體發(fā)揮直接和間接造血調(diào)控作用.然而大量研究證實(shí)放化療過(guò)程可以導(dǎo)致造血微血管的損傷,影響造血干祖細(xì)胞的歸巢和造血恢復(fù).為了進(jìn)一步觀察血營(yíng)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子在機(jī)體生后造血調(diào)控中的作用,我們將首先研究血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)造血細(xì)胞集落生成能力和內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)譜的影響,繼而通過(guò)腺病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)骨髓移植小鼠造血恢復(fù)和微血管損傷修復(fù)的促進(jìn)作用.該文分五部分:第一部分

3、VEGF對(duì)小鼠CFU-GM、CFU- E和CFU-S形成能力的維持和促進(jìn)作用; 目的:探討重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)小鼠CFU-GM、CFU-E和CFU-S生成能力的影響.結(jié)論:VEGF不僅能夠維持造血細(xì)胞集落生成能力,而且可以促進(jìn)造血細(xì)胞體外集落形成的數(shù)量.第二部分利用基因芯片技術(shù)觀測(cè)VEGF對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞 基因表達(dá)譜的影響; 目的:探討利用基因芯片技術(shù)研究血管內(nèi)皮細(xì)胞的基因表達(dá)情況,并觀測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)譜的

4、影響.結(jié)論:利用基因芯片技術(shù)在短時(shí)間內(nèi)迅速而準(zhǔn)確地分析了內(nèi)皮細(xì)胞大量的基因表達(dá)情況,證實(shí)了內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)眾多的造血生長(zhǎng)因子及VEGF對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)譜的影響,為進(jìn)一步研究VEGF和內(nèi)皮細(xì)胞的生物學(xué)特性提供了有效手段.第三部分重組腺病毒AdEGFP/hVEGF<,165>的快速構(gòu)建及其相關(guān)特性的體外研究; 目的:利用細(xì)菌內(nèi)同源重組法快速構(gòu)建增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)標(biāo)記的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子165(hVEGF<,165>)重組腺病毒

5、載體,并對(duì)其相關(guān)特性進(jìn)行體外研究. 結(jié)論:利用細(xì)菌內(nèi)同源重組法構(gòu)建腺病毒載體具有高效、省時(shí)省力的特點(diǎn),輔以EGFP為標(biāo)記基因可以直觀檢測(cè)靶細(xì)胞感染和外源基因的表達(dá)情況,利用該法構(gòu)建的重組腺病毒載體Ad-EGFP/hVEGF<,165>能夠有效感染靶細(xì)胞,高效表達(dá)活性產(chǎn)物hVEGF<,165>.該載體的成功構(gòu)建提供了有效的基因轉(zhuǎn)移手段,為深入研究VEGF在機(jī)體內(nèi)的造血調(diào)控作用奠定了良好基礎(chǔ).第四部分腺病毒介導(dǎo)的hVEGFI65基因在骨髓

6、移植小鼠體內(nèi)的表達(dá)及對(duì)造血重建的影響; 目的:探討重組腺病毒Ad-EGFP/hVEGF165介導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子在骨髓移植后小鼠體內(nèi)表達(dá)的分布情況、表達(dá)效率及安全性,并證實(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)骨髓移植小鼠造血重建的促進(jìn)作用.結(jié)論:腺病毒成功介導(dǎo)了hVEGF165基因在骨髓移植小鼠體內(nèi)的穩(wěn)定表達(dá),明顯促進(jìn)骨髓移植小鼠造血重建能力.第五部分hVEGF165基因轉(zhuǎn)移對(duì)骨髓移植小鼠骨髓微血管損傷的修復(fù)和重塑作用.目的:探討血管內(nèi)皮細(xì)胞生