血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)機(jī)制的研究.pdf

1、本研究分為兩部分:
　　第一部分:FHL1與Smad4協(xié)同抑制VEGF信號(hào)通路
　　血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）在缺血，急慢性炎癥，以及腫瘤及創(chuàng)傷等血管生成異常疾病中起著重要作用。很多因子可以調(diào)節(jié)VEGF啟動(dòng)子活性及VEGF的表達(dá)。FHL1(four and a halfLIM domains1)與Smad4便是其中2個(gè)可以調(diào)節(jié)VEGF啟動(dòng)子活性及VEGF

2、的表達(dá)的因子。FHL-1隸屬于LIM-only蛋白家族，這個(gè)家族可以調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞增殖、分化與凋亡。Smad4是一種抑癌基因，最早發(fā)現(xiàn)于胰腺癌第4位點(diǎn)基因缺失(DPC4)。本研究為了確定FHL1與Smad4是否可以協(xié)同抑制VEGF信號(hào)通路。結(jié)果顯示過表達(dá)的FHL1與Smad4可以協(xié)同抑制VEGF信號(hào)通路，而敲低內(nèi)源性表達(dá)的Smad4與FHL-1則會(huì)刺激VEGF信號(hào)通路，并且敲低內(nèi)源性Smad4表達(dá)會(huì)消除FHL-1介導(dǎo)的抑制VEGF啟

3、動(dòng)子活性作用。結(jié)論，本研究證實(shí)了FHL1與Smad4可以協(xié)同調(diào)節(jié)VEGF信號(hào)通路，可能發(fā)現(xiàn)了一種新的腫瘤的進(jìn)展與轉(zhuǎn)移機(jī)制。
　　第二部分:MARK1對(duì)VEGF信號(hào)通路的調(diào)節(jié)
　　本研究通過熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)從704個(gè)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子中篩選出可以抑制VEGF啟動(dòng)子活性的Mark1蛋白。
　　微管親和力調(diào)節(jié)酶(microtubule affinity-regulating kinase，MARK)最初從小鼠腦組織中純化出來(lái)，具有

4、絲氨酸蘇氨酸激酶活性。MARK蛋白屬于AMPK/Snf1亞家族CaMKⅡ激酶組，有著保守結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)可以分為6個(gè)結(jié)構(gòu)域，分別是:1.N端，2.催化域，3.普通停靠區(qū)域，4.泛素相關(guān)區(qū)域，5.沉默區(qū)，6.C端尾巴。
　　接著本研究證實(shí)了Mark1抑制VEGF啟動(dòng)子活性成劑量依賴方式，并且同時(shí)通過Real-time PCR證實(shí)Mark1抑制VEGF啟動(dòng)子活性，構(gòu)建了VEGF啟動(dòng)子突變體，利用熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)證實(shí)VEGF啟動(dòng)子-800/-