肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移的影響及其相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、 本文探討重組人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)體外培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移的影響及其相關(guān)作用機(jī)制。方法：從人臍靜脈體外消化分離血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)，采用含20﹪FBS的DMEM/F12培養(yǎng)HUVECs，通過倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、電鏡下觀察Weibel-Palade小體及免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)細(xì)胞中FⅧr-Ag的存在等方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。取第2～4代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的內(nèi)皮細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，分別用1ng/ml、10ng/ml、25ng/m

2、l、50ng/ml、100ng/ml濃度rhHGF作用HUVECs 24h、48h及72h后，通過細(xì)胞計(jì)數(shù)及MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，采用空白區(qū)玻片法觀察HUVECs的遷移以及透射電鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)的改變。在此基礎(chǔ)上，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)及免疫細(xì)胞化學(xué)SP法檢測(cè)細(xì)胞周期分布和細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CyclinE、CDK2表達(dá)量的改變。結(jié)論指出：rhHGF能顯著促進(jìn)HUVECs的增殖和遷移，提示其可能具有促血管生成作用，而通過上調(diào)Cyclin